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Neuroscience
0 조회수 • 2:41 분 • July 8th, 2025
마우스 배아 줄기 세포 배양으로 시작합니다.
버퍼로 세포를 세척하여 배지와 세포 파편을 제거합니다.
효소 칵테일을 추가하여 플라스크 표면에서 세포를 분리합니다.
배지를 추가하여 효소 활성을 멈추고 튜브에 세포를 수집합니다. 효소를 함유한 상청액을 원심분리하고 버립니다.
무혈청 신경 배양 배지에 세포를 재현탁합니다.
젤라틴으로 코팅된 멀티웰 플레이트 웰에 세포를 시드합니다.
인큐베이트. 배아 줄기 세포는 젤라틴으로 코팅된 표면에 부착됩니다. 영양소, 성장 인자 및 호르몬을 포함한 배지 구성 요소는 세포 증식을 촉진하고 단층을 형성합니다.
이 세포 밀도에서 배아 줄기 세포는 최적의 수준의 성장 인자와 사이토카인을 생산하고 방출합니다.
이 분자는 세포 내 신호 전달 경로를 유발하여 배아 줄기 세포가 신경 전구세포로 분화되는 것을 촉진합니다.
젤라틴을 500밀리리터의 따뜻한 PBS와 혼합하고 세포 배양 용기의 바닥을 표면을 코팅할 만큼의 용액으로 덮습니다. 젤라틴이 코팅되는 동안 마우스 배아 줄기 세포의 서브컨플루언트 배양액을 PBS에서 두 번 헹구십시오. 그런 다음 1밀리리터의 해리 시약을 배양액에 첨가합니다.
2-5분 후, 용기를 두드려 단층을 단일 세포 현탁액으로 제거하고 총 10밀리리터의 배지 및 세포 해리 시약에 배양물을 수집합니다.
세포를 15밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 원심분리기에서 회전시킵니다. 그런 다음 상청액을 조심스럽게 흡인한 후 기포가 발생하지 않도록 튜브 측면에 대해 미리 예열된 N2B27 피펫팅 10밀리리터에 펠릿을 재현탁합니다.
이제 농도를 기록한 세포를 계산하고 표에 따라 예열된 N2B27에서 웰당 단위 부피당 적절한 수의 세포로 재현탁합니다. 그런 다음 배양 용기에서 젤라틴을 흡인하고 용기를 소용돌이치지 않고 세포를 도금합니다.
배양액을 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%의 습한 인큐베이터에 넣고 1-2일마다 배지를 신선한 N2B27로 교체합니다.