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Neuroscience
0 조회수 • 2:18 분 • July 8th, 2025
다계통 분화 능력을 가진 부착된 인간 만능 줄기 세포가 포함된 멀티웰 플레이트로 시작합니다.
디메틸 설폭사이드 또는 DMSO를 함유한 줄기 세포 배지를 도입합니다.
DMSO는 세포에 들어가 세포 주기의 초기 단계인 Gap 1 또는 G1 단계에서 합성 또는 S 단계로의 세포 주기의 진행을 방지합니다.
이는 G1 단계에서 균일한 세포 집단을 생성하여 분화 능력을 향상시킵니다.
배지를 BMP 및 TGF-β 신호 전달 경로의 억제제를 포함하는 영양이 풍부한 외배엽 분화 배지로 교체하십시오.
이러한 억제제는 줄기 세포의 특정 ALK 수용체에 결합하여 BMP 및 TGF-β 신호 전달 경로를 차단하고 내배엽 및 중배엽 전구체로의 분화를 방지합니다.
이를 통해 G1 정지 줄기 세포를 신경 분화 능력을 갖는 외배엽 전구체로 선택적으로 분화
할 수 있습니다. 정기적으로배지를 신선한 배지로 교체하여 영양 및 분화 인자 수준을 유지하고 세포 생존을 보장합니다.
2D 배양에 대해 설명된 대로 DMSO로 세포를 전처리하고 Noggin 및 SP431542 스톡 용액을 준비합니다. 3-4일간의 배지 교체를 위해 녹아웃 DMEM에 충분한 10% 녹아웃 혈청 대체물 또는 KOSR을 준비합니다. 원고에 설명된 대로 예열된 KOSR 녹아웃 DMEM에 Noggin과 SP431542를 첨가하여 외배엽 분화 배지를 준비합니다.
DMSO 전처리 후 세포에서 배지를 흡인하고 각 웰에 2밀리리터의 분화 배지를 추가합니다. 세포를 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 3-4일 동안 배양하고 매일 배지를 신선한 분화 인자로 교체합니다.