Name: 저비용 폴리에틸렌 테레프탈레이트 라미네이션 미세유체역학(Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics) 설계로 멀티플렉스 제브라피시 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: 배우세요 저비용 PET 라미네이션 미세유체역학 기술로 제브라피시 배아를 다중 이미징하는 방법을. 이 기술은 염증 및 상처 치유 과정에서 화학적·기계적 자극의 통합을 연구하는 데 활용됩니다.

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<ol><li>De Oliveira, S., Rosowski, E. E., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+migration+in+infection+and+wound+repair%3A+going+forward+in+reverse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil migration in infection and wound repair: going forward in reverse.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 378-391 (2016).</li>
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</ol>

직경 <table><tbody><tr><td>25mm 원형 커버 유리 #1 두께</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1760-025</td><td>베이스 장착 재료. 두께는 현미경 렌즈의 사양에 따라 선택되었습니다.</td></tr><tr><td>Adobe Illustrator v28.5</td><td>장치 패턴을 디자인하기 위한</td> <td>Adobe</td><td>N/A</td> 벡터 편집기입니다.</tr><tr><td>염화칼슘 이수화물</td><td>피셔</td><td>C79</td><td>E3 매체 만들기용.</td></tr><tr><td>디자인 PNG 파일(온라인 미러)</td><td>N/A</td><td>N/A</td> 없음 https://i.ibb.co/QPYj7BL/multipositionalv7-1.png<<td>br/> https://i.ibb.co/FDpQYXc/multipositionalv7-2.png https://i.ibb.co/5TG4SB6/multipositionalv7-3.png</td></tr><tr><td>데스크톱용 Design Space v8.39</td><td>Cricut</td><td>N/A</td><td>크래프트 커터를 구동하는 독점 소프트웨어입니다.</td></tr><tr><td>Fusion Plus 7000L</td><td>GBC</td><td>1703098</td><td>열 라미네이터. 이 특정 모델은 최대 시트 스택 크기와 같은 삶의 질 기능을 위해 선택되었습니다.</td></tr><tr><td>독일 카바이드 프리미엄 블레이드</td><td>Cricut</td><td>10396595</td><td>크래프트 커터용 교체용 블레이드.</td></tr><tr><td>회색 기본 도구 세트</td><td>Cricut</td><td>10307854</td> 잡<td>초 제거, 매트 청소 및 PET 시트 장착을 위한 도구 세트입니다. 선택 사항.&nbsp;</td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물</td><td>아크로스 유기농</td><td>223211000</td><td>E3 배지 만들기용.</td></tr><tr><td>메이커 3</td><td>Cricut</td><td>10669040</td><td>크래프트 커터. 소프트웨어 사용자 친화성을 위해 Silhouette Cameo 4보다 Cricut Maker 3를 선택했지만 흑백 이미지를 읽을 수 있는 모든 크래프트 커터가 작동합니다.</td></tr><tr><td>MemGlow 560</td><td>세포골격</td><td>MG02-10</td><td>세포막용 적색 생세포 염료. 세탁이 필요하지 않습니다. 그림 3에 사용되었습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>No. 22 카본 메스 블레이</td>드 <td>Surgical Design</td><td> 22-079-697</td><td>수동 절단 조정을 위한 메스 블레이드. 유사한 공예 칼(예: X-acto #2 칼)도 작동합니다.</td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>피셔</td><td>BP366</td><td>E3 매체 만들기용.</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>피셔</td><td>BP358</td><td>E3 중간 만들기용.</td></tr><tr><td>StandardGrip 접착 커팅 매트</td><td>Cricut</td><td>10138842</td><td>크래프트 커터용 마운팅 매트. LightGrip 커팅 매트도 작동하지만 제초 및 제거 중에 접착제의 강도로 인해 최종 컷이 휘어질 수 있으므로 StrongGrip 및 FabricGrip 커팅 매트를 피하십시오. 매트의 접착제는 계속 사용하면 결국 마모됩니다. 필요에 따라 매트를 교체하십시오.</td></tr><tr><td>문구 테이프 12mm</td><td>Deli</td><td>30014</td><td>사무용 테이프. 델리 브랜드는 라미네이션 후 제거가 용이하기 위한 테스트를 통해 선택되었습니다.</td></tr><tr><td>슈퍼 접착제, 액체</td><td>록타이트</td><td>1364076</td> 시<td>아노아크릴레이트 접착제. <강한>사용되는 접착제는 액체여야 합니다.</강함> 젤 제형은 장치 가장자리를 충분히 밀봉하거나 방수하지 못합니다.</td></tr><tr><td>PET 열 라미네이팅 파우치, 열</td> 접착제가 있는 3mil <td>Scotch</td><td>TP3854</td><td>PET 시트. 시트는 샌드위치 쌍으로 도착하므로 사용하기 전에 분리해야 합니다. 접착면이 아래를 향하도록 자릅니다.</td></tr><tr><td>PET 열 라미네이팅 파우치, 열</td> 접착제가 있는 5mil <td>Scotch</td><td>TP5854</td><td>PET 시트. 시트는 샌드위치 쌍으로 도착하므로 사용하기 전에 분리해야 합니다. 접착면이 아래를 향하도록 자릅니다.</td></tr><tr><td>트리카인(MS-222)</td><td>Syndel</td><td>IC10310680</td><td>물고기 마취제.</td></tr></tbody></table>

저비용 폴리에틸렌 테레프탈레이트 라미네이션 미세유체역학(low-cost polyethylene terephthalate lamination microfluidics) 설계로 멀티플렉스 제브라피시 이미징

Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics Designs for Multiplexed Zebrafish Imaging

RADISH의 도움을 받거나 받지 않은 레이저 스캐닝 컨포칼로 생성된 이미지 품질을 비교하기 위해 외부 상피층에서 인텐시메트릭 칼슘 바이오센서 GCaMP6f22,24를 발현하는 배아를 MemGlow 560을 사용하여 염색하고 프레임당 1분의 시간 간격으로 꼬리 지느러미 주름의 전체 두께를 커버하는 역 레이저 스캐닝 컨포칼로 이미지화했습니다(비디오 2). 장치를 사용하지 않으면(그림 3A) 샘플이 크게 드리프트되고 밴딩 아티팩트가 표시되었으며, 이는 장치를 사용한 이미징과 비교하여 지정된 시간 해상도에 맞추기 위해 Z 스택을 25개의 슬라이스로 제한한 결과입니다(그림 3B). RADISH는 Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt1821을 발현하는 배아에서 상처 직후의 칼슘 과도 현상을 조사하기 위해 추가로 사용되었으며, 빨간색의 내인성 E-cadherin과 녹색의 정점 상피에서 세포질 칼슘을 강조했습니다. 배아는 메스 날(그림 4A 및 비디오 3)을 사용하거나 IR 레이저(그림 4B)를 사용한 직접 레이저 절제(그림 4B)를 통해 중앙 챔버의 측면과 평행하게 상처를 입힌 다음 꼬리 지느러미 주름의 전체 두께를 통해 이미지화했습니다. 
장기 이미징에 대한 RADISH의 효과를 입증하기 위해 상처 후 24시간 동안 상처 가장자리에 대한 면역 세포 동원을 조사했습니다. 녹색23의 호중구를 표지하기 위해 Tol2(mpx:Dendra2)를 발현하는 3 dpf의 4개의 제브라피시 배아가 꼬리 절개에 의해 상처를 입고 24시간 동안 연속으로 이미지화되었습니다(그림 5). 일반적으로 3 dpf 후반에서 4 dpf 배아와 관련된 틸팅 및 플로팅과 같은 이미징 아티팩트는 현저히 없었으며(비디오 4), 실험에서 조직 재생이 방해받지 않고 계속되었습니다. 상처 가장자리에 대한 호중구 동원은 이미지 전체에서 계속되며(그림 5B), 대부분의 이동 세포는 상처 입은 후 24시간(그림 5C)까지 떠나며, 이는 예상 염증 해상도25,26과 일치합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig01.jpg"> 
그림 1: PET 라미네이트 미세유체 장치(RADISH)의 설계 및 사용.(A) 개별 PET 층의 배열 및 두께, 조립, 장치 장착 및 사용을 보여주는 개략도. (B) 35mm 접시에 3/4" 컷아웃에 장착된 최종 제품. (C) 3개의 dpf 배아, (D) 5개의 dpf 배아, (E) 장치 내부에 수용된 14개의 dpf 배아. 눈금자 = 1,000μm(C,D,E). 약어 : PET = 폴리에틸렌 테레 프탈레이트; RADISH = 후속 치유의 Danio 이미징을 위한 회전 보조자; dpf = 수정 후 일수. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig02.jpg"> 
그림 2: PET 장치 조립의 단계별 사진 그림. (A) 적층 전의 개별 PET 층. (B) 사무용 테이프를 사용하여 25mm 커버슬립으로 고정된 PET 층. (C) 라미네이션을 위해 플라스틱 지지대에 고정된 진행 중인 장치. (D) PET 라미네이트 장치 완성. (E) 장치 장착 전에 수정된 35mm 접시. (F) 완성된 장치. 약어 : PET = 폴리에틸렌 테레 프탈레이트. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig03.jpg"> 
그림 3: RADISH 디자인에서 3 dpf 배아의 레이저 스캐닝 컨포칼 이미지 품질 향상. (A) RADISH를 사용하지 않고 MemGlow 560으로 염색한 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) 배아의 대표 이미지. (B) 무에 장착된 MemGlow 560으로 염색된 Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) 배아의 대표 이미지. 눈금 막대 = 100μm. 약어: RADISH = Rotational Assistant for Danio Imaging of subsequent healing; dpf = 수정 후 일수. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig04.jpg"> 
그림 4: RADISH 설계와 여러 상처 기법의 호환성. (A) 수동 꼬리지느러미 절개를 통해 상처를 입은 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 배아. (B) 레이저 절제술을 통해 상처를 입은 배아. (씨,디) 4분 후 동일한 배아가 상처 입은 후 칼슘 과도기의 진행을 보여줍니다. 스케일 바 = 100μm. 약어: RADISH = Rotational Assistant for Danio Imaging of subsequent healing; dpf = 수정 후 일수. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig05.jpg"> 
그림 5: 식세포 이동의 이미징을 위한 배아의 장기 포획. (A) Tol2(mpx:Dendra2) 배아는 상처 직후, 동일한 배아는 (B) 25분, (C) 12시간, (D) 24시간 후. 스케일 바 = 100μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 1: 그림 1A와 같이 RADISH 장치 설계를 위한 벡터 및 PNG 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313_Supp%20File%201.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
비디오 1: RADISH 장치 설계를 사용한 수동 꼬리지느러미 절편의 명시야 비디오. 약어 : RADISH = 후속 치유의 Danio 이미징에 대한 회전 보조. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%201.mp4" target="_blank">이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
비디오 2: 그림 3의 마운트되지 않은 배아와 마운트된 3dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) 배아를 1 프레임/분으로 획득한 배아의 비교. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%202.mp4" target="_blank">이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
비디오 3: 그림 4의 메스 절제 또는 레이저 절제를 통해 상처를 입은 Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 배아의 칼슘 과도 현상, 1프레임/분으로 획득. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%203.mp4" target="_blank">이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
비디오 4: Tol2(mpx:Dendra2) 배아에서 백혈구 모집 및 꼬리 지느러미 재생의 장기 이미징. 약어: RADISH = Rotational Assistant for Danio Imaging of subsequent healing; hpw = 부상 후 시간. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%204.mp4" target="_blank">이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

저비용 폴리에틸렌 테레프탈레이트 라미네이션 미세유체역학(Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics) 설계로 멀티플렉스 제브라피시 이미징

Zebrafish embryos are transparent and thus uniquely suited for noninvasive intravital imaging of fundamental processes, such as wound healing and immune ...

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Research

JoVE Journal

Biology

간단한 마이크로 유체 장치는 마취 무료를 수행하기 위해...

에 대한 간단한 마이크로 유체 장치<em&gt; 생체 내</em의&gt; 이미징<em&gt; C. elegans</em&gt;<em&gt; Drosophila</em&gt;와 Zebrafish

제브라 피쉬의 개발은 배아가 낮은 농도의 아가로 오스와 광학적으로 명확한 폴리머 튜브에 포함 된 빛 시트 현미경과 일에 따라 할 수있다.

다층 제브라 피쉬의 장기 라이트 시트 현미경에 장착

제브라 피쉬 배아 조직 특정 형광의 반 자동화 이미징을위한 프로토콜은 여기에 설명한다.

Zebrafish의 태아의 조직 특이 형광의 반 자동화 이미징

이 원고는 zWEDGI에 설명 합니다 (zebrafish Wounding 및 성장 및 이미징 함정 장치)는 compartmentalized 장치 방향 및 zebrafish 애벌레를 억제 하도록 설계 되었습니다. 디자인 꼬리 transection 및 상처 치유와 재생의 고해상도 형광 현미경 이미지의 장기 수집을 허용합니다.

Zebrafish 애벌레의 향상 된 실험적인 조작에 대 한 장기 라이브 이미징 장치

Zebrafish 태아 그리고 애벌레의 microinjection 많은 zebrafish 모델에서 사용 되는 중요 하지만 어려운 기술 이다. 여기, 우리 미 도구 안정화에 도움의 범위와 microinjection 및 이미징 zebrafish의 방향 제시.

최적화 된 Microinjection 및 Zebrafish 애벌레의 이미징 microstructured 장치

여기에서 우리는 최소한의 재정적 및 시간 적 투자로 맞춤형 미세 유체 장치를 설계하고 제작하는 프로토콜을 제시합니다. 목표는 생물 의학 연구 실험실 및 교육 환경에서 미세 유체 기술의 채택을 용이하게하는 것입니다.

연구 및 교육 응용 프로그램을 위한 맞춤형 미세 유체 장치의 신속한 제조

이 문서에서는 연장된 시간 경과 공초점 현미경 검사법을 위해 깨지기 쉬운 제브라피시 배아를 장착하는 방법에 대해 설명합니다. 이 저가형 방법은 모든 반전된 현미경에 이미징을 위해 일반 유리 바닥 현미경 접시를 사용하여 쉽게 수행할 수 있습니다. 장착은 다른 농도에서 아가로즈의 층에서 수행됩니다.

전체 얼룩말 배아의 연장된 시간 경과 공초점 현미경 검사법을 위한 레이어형 장착 방법

우리는 빛 시트 형광 현미경 검사법과 생체 내 제브라피시 심장을 연구하는 최적화 된 도구를 설명합니다. 특히, 우리는 밝은 심장 형질 전환선을 제안하고 발달과 심장 결함을 피하는 새로운 부드러운 임베드 및 고정 기술을 제시합니다. 심장 이미징에 적응된 가능한 데이터 수집 및 분석 파이프라인도 제공됩니다.

얼룩말 물고기 배아에서 빠른 심장 역학의 빛 시트 현미경 검사

이 프로토콜은 광시트 이미징을 활용하여 제브라피시 유충의 심장 수축 기능을 조사하고 세포 추적 및 대화형 분석을 통해 심장 역학에 대한 통찰력을 얻습니다.

제브라피시 심장 수축의 4D 광시트 이미징

광시트 현미경을 사용하여 온전한 융모막 내에서 초기 제브라피시 배아를 이미징하기 위한 샘플 준비 전략이 설명되어 있습니다. 70% epiboly 및 bud 단계에서 배아가 융모막 내에서 획득하는 다양한 방향을 분석하고 광시트 시스템을 사용하여 배아 전체에서 세포 규모의 해상도를 얻기 위한 이미징 전략을 자세히 설명합니다.

Light Sheet Microscopy Imaging and Mounting Strategies for Early Zebrafish Embryos

배우세요 저비용 PET 라미네이션 미세유체역학 기술로 제브라피시 배아를 다중 이미징하는 방법을. 이 기술은 염증 및 상처 치유 과정에서 화학적·기계적 자극의 통합을 연구하는 데 활용됩니다.

저비용 폴리에틸렌 테레프탈레이트 라미네이션 미세유체역학(Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics) 설계로 멀티플렉스 제브라피시 이미징

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