Name: 돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 배우세요 돼지 지방 조직에서 효소 소화와 기계적 파동 분리를 결합하여 지방 유래 줄기세포와 지방세포를 신속하게 분리하는 방법. 이 프로토콜은 세포 생존율을 높이고 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%3A+where+challenge+meets+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on adipose-derived stem cells for regenerative medicine: where challenge meets opportunity.</a> Adv Sci. 10 (20), 1-27 (2023).</li>
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<li>Alexandersson, I., Harms, M. J., Boucher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+mature+adipocytes+using+membrane+mature+adipocyte+aggregate+cultures+%28MAAC%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human mature adipocytes using membrane mature adipocyte aggregate cultures (MAAC).</a> J Vis Exp. (156), e60485(2020).</li>
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<li>Uguten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+mechanical+and+enzymatic+isolation+procedures+to+isolate+adipose-derived+stromal+vascular+fraction%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Comparing mechanical and enzymatic isolation procedures to isolate adipose-derived stromal vascular fraction: a systematic review.</a> Wound Repair Regen. 32 (6), 1008-1021 (2024).</li>
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<li>Liu, Y., Zhao, H., Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+laboratory-based+strategy+for+single+adipocyte+and+adipose-derived+stem+cells+extraction+for+transplantation%3A+an+experimental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel laboratory-based strategy for single adipocyte and adipose-derived stem cells extraction for transplantation: an experimental research.</a> Aesthet Plast Surg. 49, 367-379 (2025).</li>
<li>Tangkanjanavelukul, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+regeneration+potential+in+early+osteoarthritis+of+the+knee%3A+a+prospective%2C+randomized%2C+open%2C+and+blinded+endpoint+study+comparing+adipose-derived+mesenchymal+stem+cell+%28ADSC%29+therapy+versus+hyaluronic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cartilage regeneration potential in early osteoarthritis of the knee: a prospective, randomized, open, and blinded endpoint study comparing adipose-derived mesenchymal stem cell (ADSC) therapy versus hyaluronic acid.</a> Int J Mol Sci. 26 (17), 8476(2025).</li>
<li>Qayyum, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+allogeneic+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cell+treatment+in+chronic+ischaemic+heart+failure+with+reduced+ejection+fraction+%E2%80%93+the+SCIENCE+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Effect of allogeneic adipose tissue-derived mesenchymal stromal cell treatment in chronic ischaemic heart failure with reduced ejection fraction – the SCIENCE trial.</a> Eur J Heart Fail. 25 (4), 576-587 (2023).</li>
<li>Arab, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+feasibility+of+intravenous+fresh+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+in+secondary+progressive+multiple+sclerosis%3A+phase+I%2FIIa+clinical+results%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Safety and feasibility of intravenous fresh adipose-derived mesenchymal stem cells in secondary progressive multiple sclerosis: phase I/IIa clinical results.</a> Stem Cell Res Ther. 17, 120(2026).</li>
<li>Sheykhhasan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+and+mechanistic+insights+into+adipose-derived+stem+cells+and+mesenchymal+stem+cell-derived+exosomes+in+patients+with+Crohn%E2%80%99s+disease-associated+fistulas%3A+challenges+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential and mechanistic insights into adipose-derived stem cells and mesenchymal stem cell-derived exosomes in patients with Crohn’s disease-associated fistulas: challenges and future perspectives.</a> Stem Cell Res Ther. 16, 664(2025).</li>
<li>Dufau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+models+of+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo models of adipocytes.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 320 (5), C822-C841 (2021).</li>
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<li>Zhu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+methods%2C+proliferation%2C+and+adipogenic+differentiation+of+adipose-derived+stem+cells+from+different+fat+depots+in+bovines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Isolation methods, proliferation, and adipogenic differentiation of adipose-derived stem cells from different fat depots in bovines.</a> Mol Cell Biochem. , (2023).</li>
<li>Benitez, G. J., Shinoda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adipose+tissue+nuclei+for+single-cell+genomic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of adipose tissue nuclei for single-cell genomic applications.</a> J Vis Exp. (160), e61230(2020).</li>
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<table><tbody><tr><td>타입 조직 해리 키트</td><td>닥센스</td><td>TM001</td><td>유형 조직 해리 작용제(A형 용액)와 유형 조직 해리 버퍼(A-버퍼)를 포함하고 있습니다.</td></tr><tr><td>지방생성 분화 배지 키트</td><td>오리셀</td><td>GUXMD-90031</td><td>지방생성 분화에 사용되며, 고포도당 돌벡코 변형 이글스 매체(변형되지 않음) 및 유지 매개체 포함</td></tr><tr><td>알리자린 레드 S</td><td>오리셀</td><td>A5533ALIR-10001</td><td>골생성 분화를 위한 광물화 염색(pH 5.2)</td></tr><tr><td>아스코르브산</td><td>시그마-올드리치</td><td>A4544</td><td>L-아스코르브산, 골 유도를 위한 세포 배양 검사</td></tr><tr><td>바마 미니피그</td><td>청두 도시 실험동물 유한회사</td><td></td><td>1살 된 수컷, SPF 등급 동물이 표준화된 예방접종, 구충, 청소 절차를 거치고 관리됩니다. https://www.cd-dossy.cn/animalpl_detail/12606067609851863 04.html</td></tr><tr><td>바이오래드 TC20 자동 세포 계수기</td><td>바이오-래드 연구소</td><td>1450011</td><td>생존 가능성 및 수확량 평가를 위한 자동 세포 계수기</td></tr><tr><td>몸</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>D3922</td><td>중성 지질 염색</td></tr><tr><td>BSA (5%)</td><td>시그마-올드리치</td><td>A9418</td><td>소 혈청 알부민, 동염 분말, 차단</td></tr><tr><td>칼시트리올</td><td>시그마-올드리치</td><td>C9756</td><td>1&alpha;,25-디하이드록시비타민 D3, 골 유도 목적</td></tr><tr><td>셀 체(70 & MU; m)</td><td>코닝</td><td>352350</td><td>팔콘 70 & 뮤; FACS 샘플 준비를 위한 멸균 M 세포 체감</td></tr><tr><td>셀 스트레이너 (200 & MU; m)</td><td>플루리 셀렉트</td><td>43-50200-03</td><td>pluriStrainer, PET 메쉬, 50mL 튜브에 맞고, 멸균 및 nbsp;</td></tr><tr><td>원심분리관 (50 mL)</td><td>코닝</td><td>352098</td><td>팔콘 50 mL 고투명도 원뿔 튜브, 멸균, 폴리프로필렌</td></tr><tr><td>카운팅 슬라이드 (바이오-래드 TC20용)</td><td>바이오-래드 연구소</td><td>1450011</td><td>TC20 자동 셀 카운터용 이중 챔버 카운팅 슬라이드;</td></tr><tr><td>배양 접시 (100 mm)</td><td>코닝</td><td>430167</td><td>무균 폴리스티렌 접시, 매달린 방울 오가노이드 형성을 위한</td></tr><tr><td>덱사메타손</td><td>시그마-올드리치</td><td>D4902</td><td>&ge; 지방 생성 및 골 유도 98%</td></tr><tr><td>D-행크스 균형 소금 용액(PBS)</td><td>깁코</td><td>10010015</td><td>4도 및 4도까지 미리 냉각; C, pH 7.4.</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>깁코</td><td>11965084</td><td>이는 신선한 고리 SVF 배양에 사용됩니다</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>비요타임</td><td>D7073</td><td>선택 사항이며, 뭉치는 현상이 관찰되면 권장됩니다.</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>459836</td><td>표면 소독은 75%입니다.</td></tr><tr><td>태아 소 혈청 (FBS)</td><td>깁코</td><td>A4736201</td><td>테트 시스템 승인, 미국산, 멸균 및 nbsp;</td></tr><tr><td>플로우 사이토미터</td><td>BD 생명과학</td><td>BD FACS칸토 II</td><td>3개의 레이저(405 nm, 488 nm, 633 nm), 8개의 형광 채널, 표면 마커 분석용(CD73, CD90, CD11b, CD45), 70 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/70464/70464eq1.jpg" style="margin: auto; "/>m 노즐 요구량, 20 psi</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>올림포스</td><td></td><td>FITC 및 DAPI 필터 세트를 사용할 수 있는 역방향 또는 직립형 모델.</td></tr><tr><td>형광 2차 항체</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>A-11001 (대쥐), A-11008 (대토끼)</td><td>알렉사 플루오 접합, 면역형광</td></tr><tr><td>플루오로크롬 결합 항체 (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD 생명과학</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>ADSC 표현형의 유세포분석</td></tr><tr><td>호에스트(Hoechst)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>H3570</td><td>생전/죽음 세포 평가를 위한 핵 염색.</td></tr><tr><td>IBMX</td><td>시그마-올드리치</td><td>I5879</td><td>&ge; 99% (HPLC), 지방 유도 배양액</td></tr><tr><td>얼음처럼 차갑고 멸균된 식리식염수</td><td>백스터</td><td>2F7124</td><td>0.9% 염화나트륨 주입, USP, 조직 세척</td></tr><tr><td>인슐린</td><td>시그마-올드리치</td><td>I9278</td><td>효모 내에서 발현된 재조합, 지방생성 유도</td></tr><tr><td>요오포르</td><td>시그마-올드리치</td><td>25104</td><td>2% 소독제.</td></tr><tr><td>마트리젤</td><td>코닝</td><td>354230</td><td>성장인자 감소, 페놀 적색 없음, 구형 내비를 위한 nbsp;</td></tr><tr><td>메탈 배스</td><td>서비스바이오</td><td>SMB-H</td><td>37도 C에서 부화 용도로 사용.</td></tr><tr><td>오일 레드 O</td><td>오리셀</td><td>오일러-10001</td><td>지방세포 분화를 위한 지질 염색</td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>올림포스</td><td></td><td>표준 밝시야 현미경(10x&ndash); 40배 목표.</td></tr><tr><td>골생성 분화 배지 키트</td><td>오리셀</td><td>GUXMD-90021</td><td>골형성 분화에 사용되며, 고포도당 Dulbecco's modified Eagle's medium(변형되지 않음) 및 유지 배지를 포함합니다</td></tr><tr><td>넓은 보어 팁이 있는 P1000 피펫</td><td>벡먼 쿨터</td><td>B01113</td><td>바이오멕 P1000 스팬-8 와이드 보어 팁, 멸균</td></tr><tr><td>파라포름알데히드 (4%)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>J61899</td><td>오가노이드 고정을 위한 수용액;</td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>코닝</td><td>7095S-5C</td><td>멸균되고 일회용.</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>깁코</td><td>15070063</td><td>10,000 U/mL 페니실린, 10,000 & mu; g/mL 스트렙토마이신, 멸균 &nbsp;</td></tr><tr><td>펜토바르비탈 나트륨</td><td>히크마 제약스 USA 주식회사</td><td>24201-010-20</td><td>안락사를 위한 주사(체중 100mg/kg, 정맥 주사). 안다 203619&nbsp;</td></tr><tr><td>1차 항체 (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD 생명과학</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>오가노이드 면역염색을 위해</td></tr><tr><td>적혈구(RBC) 용해 버퍼</td><td>솔라비오</td><td>R1010</td><td>필요하다면 후속 응용에 적합합니다.</td></tr><tr><td>냉장 원심분리기</td><td>에펜도르프</td><td>5702R</td><td>원심분리 단계에 4 & 도C에서 사용됩니다.</td></tr><tr><td>로지글리타존</td><td>케이맨 케미컬</td><td>71740</td><td>&ge; 98%, PPAR와 감마; 지방 유도 작용제 작용제</td></tr><tr><td>샤프스 용기</td><td>벡턴 디킨슨</td><td>305270</td><td>중고 칼날과 가위용 구멍 방지 용기</td></tr><tr><td>SoniConvert 단일 전지 현탁 준비 시스템</td><td>닥센스</td><td>SC-L1W</td><td>조직의 기계적 해리에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>염색 버퍼(유동 세포 염색 버퍼)</td><td>eBioscience (Thermo Fisher Scientific)</td><td>00-4222-57</td><td>200mL는 즉시 사용 가능하며, 항체 및 세포 희석, 표면 염색 및 유동 세포 세척 단계에 사용되는 방부제로 FBS와 0.09% 아지드 나트륨을 함유하고 있습니다;</td></tr><tr><td>멸균 1.5 mL 에펜도르프 튜브</td><td>에펜도르프</td><td>30121.517</td><td>세이프락 마이크로 원심분리기 튜브, 멸균, 조직 다짐용.</td></tr><tr><td>멸균 배양 배양 배열</td><td>코닝</td><td>430167</td><td>100 mm x 20 mm 멸균 배양 접시, 조직 채취용입니다</td></tr><tr><td>멸균 겸자</td><td>스클라</td><td>96-1719</td><td>멸균 엄지 겸자, 톱니 모양, 조직 취급용.nbsp;</td></tr><tr><td>멸균 거즈</td><td>두칼 코퍼레이션</td><td>7060033</td><td>소독과 닦기 위한 멸균 거즈 패드</td></tr><tr><td>멸균 안과 가위</td><td>스클라</td><td>10023-580</td><td>1-2mm 두께로 조직을 다지는 데 사용하는 Vannas 스타일의 스프링 가위; 작품</td></tr><tr><td>멸균 면도기</td><td>3M</td><td>9681</td><td>수술 부위 제모용 외과용 준비 면도기</td></tr><tr><td>멸균 메스</td><td>인테그라 밀텍스</td><td>4-415</td><td>절개를 위한 멸균 일회용 메스</td></tr><tr><td>멸균 수술용 가위</td><td>스클라</td><td>10022-580</td><td>혈관 및 결합조직 해리용 Merit 멸균 홍채 가위;</td></tr><tr><td>T25 세포 배양 플라스크</td><td>코닝</td><td>430639</td><td>팔콘 T25 세포 배양 플라스크, 통풍 캡, 멸균</td></tr><tr><td>트라이톤 X-100 (0.1%)</td><td>시그마-올드리치</td><td>T8787</td><td>실험실 등급, 투과화용;</td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>깁코, 써모피셔 사이언티브</td><td>15250061</td><td>세포 생존성 계산에 대한 0.4% 해법.</td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.25%)</td><td>깁코</td><td>25200056</td><td>0.25% 트립신, 1 mM EDTA, ADSC 분리 시</td></tr><tr><td>&β;-글리세로인산</td><td>시그마-올드리치</td><td>G9422</td><td>이나트륨 오하이드레이트, 골 유도</td></tr></tbody></table>

돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리

Efficient Isolation of Adipose-derived Stem Cells and Adipocytes from Porcine Adipose Tissue

Adipose-derived stem cells (ADSCs) have emerged as ideal seed cells in regenerative medicine due to their abundant sources, minimally invasive harvesting, ...

efficient-isolation-adipose-derived-stem-cells-adipocytes-from

Research

JoVE Journal

Biology

이 비디오는 쥐 대동맥 주위 지방 조직에서 형광 표지된 신경능선 유래 지방 유래 줄기세포(ADSC)를 분리 및 배양하는 기술을 보여줍니다. 분리 후 NCADSC를 검출하고 형광 활성화 세포 분류를 사용하여 분류한 후 플레이트에서 배양하여 세포 증식을 촉진합니다.

쥐 대동맥 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 분리

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

이 프로토콜은 다능성 검사를 통해 피하 지방 조직에서 돼지 지방 유래 줄기 세포(pADSC)를 분리하는 방법을 설명합니다. 다분성 pADSC는 지방 세포 분화 과정을 설명하고 재생 연구를 위해 중배엽 중간엽의 여러 세포 계통 또는 외배엽 및 내배엽의 추가 계통으로의 전분화를 연구하는 데 사용됩니다.

돼지 피하 지방이 조직에서 분리 및 지방이 유래 줄기 세포의 분화

이 프로토콜은 형광 활성화 세포 분류 또는 면역자기 비드 분리를 통해 쥐 복강 내 백색 지방 조직(WAT) 저장소에서 지방 형성 및 섬유 염증성 기질 세포 하위 집단을 분리하는 기술적 접근 방식을 설명합니다.

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

우리는 형광 활성화 세포 분류를 사용하여 마우스 전도성 지방 패드에서 매우 실행 가능한 지방 전구 세포를 분리하는 간단한 방법을 제시한다.

마우스 전형 지방 조직에서 지방 전구의 준비

우리는 세포 생존력, 증식 및 탄력성 측정 측면에서 배달 후 조사의 후유증과 결합 된 바늘이없는 워터젯 기술을 통한 세포 주입 방법을 제시합니다.

워터젯 기술을 통한 돼지 지방 조직 유래 스트로마 세포 주입

지방 조직 유래 중간엽 줄기 세포 (Ad-MSCs)는 인슐린 생산 세포 (IPCs)로 분화되는 MSCs의 잠재적 인 원천이 될 수 있습니다. 이 프로토콜에서, 우리는 래트 부고환 Ad-MSCs의 분리 및 특성화를위한 상세한 단계를 제공하고, 동일한 래트 Ad-MSCs로부터의 IPC의 생성을위한 간단하고 짧은 프로토콜을 제공한다.

인슐린 생성 세포로 분화를 위한 쥐 지방조직 중간엽 줄기세포의 분리

이 프로토콜은 Sprague Dawley 쥐에서 지방 조직 유래 중간엽 줄기 세포(MSC)를 분리하고 식별하는 방법론을 설명합니다.

Sprague Dawley 쥐의 지방 조직에서 유래한 중간엽 줄기 세포의 분리 및 식별

이 프로토콜은 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 달성하기 위해 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 분획(SVF)의 반자동 분리를 설명합니다. 콜라게나제 분해를 위해 조직 해리제를 사용하면 실험 변동이 줄어들고 재현성이 높아집니다.

조직 해리기를 사용하여 쥐 백색 지방 조직에서 기질 혈관 분획의 반자동 분리

우리는 개발하는 동안 중요한 조혈 기관으로 태반을 확인했습니다. 우리는 조혈 줄기 세포 (HSCs)이 생성되는 독특한 microenvironmental 틈새의 태반에서 확장 둘 발견했습니다. 여기, 우리는 마우스 태반에 HSCs의 격리 및 시각화에 필요한 실험 기법을 설명합니다.

태반에서 조혈 줄기 세포의 분리 및 분석

배우세요 돼지 지방 조직에서 효소 소화와 기계적 파동 분리를 결합하여 지방 유래 줄기세포와 지방세포를 신속하게 분리하는 방법. 이 프로토콜은 세포 생존율을 높이고 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리

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