Name: Generatie en eencel-transcriptomische analyse van hepatocellulaire carcinoomorganoïden na medicamenteuze behandeling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-26T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 18 s
Description: Ontdek een gestandaardiseerde workflow voor het genereren van hepatocellulaire carcinoomorganoïden, medicamenteuze behandeling met lenvatinib en eencel-RNA-sequencing. Deze methode analyseert transcriptomische veranderingen voor en na behandeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Villanueva, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocellular+carcinoma.">Hepatocellular carcinoma.</a> N Engl J Med. 380 (15), 1450-1462 (2019).</li><li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2018:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 68 (6), 394-424 (2018).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Safri, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+hepatocellular+carcinoma:+from+mechanisms+to+clinical+implications.">Heterogeneity of hepatocellular carcinoma: from mechanisms to clinical implications.</a> Cancer Gene Ther. 31 (8), 1105-1112 (2024).</li><li>Zhang, X. F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cell-state+plasticity+driven+by+FOXM1/CEBPB+axis+disrupts+developmental+heterogeneity+and+therapeutic+resistance+in+hepatocellular+carcinoma.">Targeting cell-state plasticity driven by FOXM1/CEBPB axis disrupts developmental heterogeneity and therapeutic resistance in hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 84 (2), 370-384 (2026).</li><li>Thorel, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumor+organoids:+a+new+avenue+for+preclinical+research+and+precision+medicine+in+oncology.">Patient-derived tumor organoids: a new avenue for preclinical research and precision medicine in oncology.</a> Exp Mol Med. 56 (7), 1531-1551 (2024).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+decade+of+liver+organoids:+advances+in+disease+modeling.">A decade of liver organoids: advances in disease modeling.</a> Clin Mol Hepatol. 29 (3), 643-669 (2023).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+liver+cancer+organoids+reveal+intratumor+and+interpatient+drug+response+heterogeneity.">Human primary liver cancer organoids reveal intratumor and interpatient drug response heterogeneity.</a> JCI Insight. 4 (2), e121490 (2019).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacogenomic+profiling+of+intra-tumor+heterogeneity+using+a+large+organoid+biobank+of+liver+cancer.">Pharmacogenomic profiling of intra-tumor heterogeneity using a large organoid biobank of liver cancer.</a> Cancer Cell. 42 (4), 535-551.e8 (2024).</li><li>Xing, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-based+therapies+in+hepatocellular+carcinoma:+state+of+the+art+and+clinical+perspectives.">RNA-based therapies in hepatocellular carcinoma: state of the art and clinical perspectives.</a> Hepatoma Res. 10, 24 (2024).</li><li>Aissa, A. F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+transcriptional+changes+associated+with+drug+tolerance+and+response+to+combination+therapies+in+cancer.">Single-cell transcriptional changes associated with drug tolerance and response to combination therapies in cancer.</a> Nat Commun. 12 (1), 1628 (2021).</li><li>Zhang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+optimization+of+a+human+hepatocellular+carcinoma+patient-derived+organoid+model+for+potential+target+identification+and+drug+discovery.">Development and optimization of a human hepatocellular carcinoma patient-derived organoid model for potential target identification and drug discovery.</a> J Vis Exp. (198), e65785 (2023).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breakthroughs+and+challenges+of+organoid+models+for+assessing+cancer+immunotherapy:+a+cutting-edge+tool+for+advancing+personalised+treatments.">Breakthroughs and challenges of organoid models for assessing cancer immunotherapy: a cutting-edge tool for advancing personalised treatments.</a> Cell Death Discov. 11 (1), 222 (2025).</li><li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+methods+of+different+tumor+organoids+and+their+application+in+tumor+drug+resistance+research.">Modeling methods of different tumor organoids and their application in tumor drug resistance research.</a> Cancer Drug Resist. 8, 32 (2025).</li><li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows.">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130 (2020).</li><li>Yip, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Give+them+vasculature+and+immune+cells:+how+to+fill+the+gap+of+organoids.">Give them vasculature and immune cells: how to fill the gap of organoids.</a> Cells Tissues Organs. 212 (5), 369-382 (2023).</li><li>Zhou, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+organoid+culture+in+cancer+research.">Standardization of organoid culture in cancer research.</a> Cancer Med. 12 (13), 14375-14386 (2023).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>[Leu15]-gastrin I human</td><td>Merck</td><td>G9145</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Microtubes</td><td>Merck</td><td>AXYMCT150LC</td><td></td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>2.0ml Internal Thread Cryogenic Vials</td><td>Nest</td><td>607001</td><td></td></tr><tr><td>A8301 (TGFb inhibitor)</td><td>Tocris Bioscience</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>AFP Polyclonal antibody</td><td>Proteintech</td><td>14550-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Albumin antibody [ALB/2144]</td><td>abcam</td><td>ab236492</td><td></td></tr><tr><td>Anti-HNF-4-alpha antibody [EPR16885] - ChIP Grade</td><td>abcam</td><td>ab181604</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Prealbumin antibody [EPR3219]</td><td>abcam</td><td>ab92469</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SOX9 antibody [EPR14335-78]</td><td>abcam</td><td>ab185966</td><td></td></tr><tr><td>B27 Supplement (503), minus vitamin A</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Cell Recovery Solution, 100 mL</td><td>Corning</td><td>354253</td><td>Reagens gebruikt om basement membrane matrix op te lossen en organoïden te herstellen voor herplanten of verwerking in volgende stappen</td></tr><tr><td>CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay</td><td>Promega</td><td>G9681</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Merck</td><td>SML1046</td><td></td></tr><tr><td>Chromium Next GEM Single Cell 3' GEM, Library & Gel Bead Kit v3.1</td><td>10x Genomics</td><td>CG000227</td><td></td></tr><tr><td>Corning Cell Strainer, 40 μm, Blue, S, IND, 1/50</td><td>Corning</td><td>431750</td><td></td></tr><tr><td>Costar 24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates, Individually Wrapped, Sterile</td><td>Corning</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Reduced Growth Factor BME, Type 2 PathClear (BME)</td><td>Merck</td><td>3533-005-02</td><td>Extracellulaire matrix gebruikt om driedimensionale organoïdcultuur en domevorming te ondersteunen</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>C6164</td><td>Oplosmiddel gebruikt om drugsstockoplossingen en voertuigregelingsoplossingen voor te bereiden</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham's F-12</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>Geavanceerd DMEM/F-12</td></tr><tr><td>E7080 (Lenvatinib)</td><td>Selleck</td><td>S1164</td><td>Tyrosinekinaseremmer gebruikt voor organoïdbehandeling en therapeutische verstoring</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum Value FBS</td><td>Gibco</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1099</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td><td>Beyotime</td><td>C0105S</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, 1 M</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Leica DM6 B Fluorescerende gemotoriseerde microscoop</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>N2 supplement (1003)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acetylcysteïne</td><td>Merck</td><td>A0737-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Merck</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline</td><td>GENOM BIO</td><td>GNM20012</td><td>Buffer gebruikt voor het wassen van organoïden en het voorbereiden van monsters voor verwerking in volgende stappen</td></tr><tr><td>Recombinant human EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human HGF</td><td>Peprotech</td><td>100-39</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td></td></tr><tr><td>Rho kinase inhibitor Y-27632 dihydrochloride</td><td>Merck</td><td>Y0503</td><td>ROCK-remmer gebruikt om organoïdoverleving na ontdooien of passeren te verbeteren</td></tr><tr><td>R-spodin1-geconditioneerd medium</td><td>(Broutier et al.)</td><td>N/A</td><td>Secretie van cellijnen</td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain, 0,4% membraan gefilterd, bereid in 0,85% zoutoplossing</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1x), geen fenolrood</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12604013</td><td>Trypsine-substituut</td></tr><tr><td>Wnt-3a-geconditioneerd medium</td><td>(Broutier et al.)</td><td>N/A</td><td>Secretie van cellijnen</td></tr></tbody></table>

generatie en eencel-transcriptomische analyse van hepatocellulaire carcinoomorganoïden na medicamenteuze behandeling

Generation and Single-Cell Transcriptomic Analysis of Hepatocellular Carcinoma Organoids following Drug Treatment

Generatie en eencel-transcriptomische analyse van hepatocellulaire carcinoomorganoïden na medicamenteuze behandeling

Hepatocellular carcinoma is a major cause of cancer-related mortality worldwide and is characterized by marked intratumoral heterogeneity, which ...

generation-single-cell-transcriptomic-analysis-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dit protocol beschrijft een semi-geautomatiseerde methode voor medium- tot high-throughput organoïde medicijnscreenings en microscoop-agnostische, geautomatiseerde beeldanalysesoftware om multiparametrische, single-organoïde geneesmiddelresponsen te kwantificeren en te visualiseren om intratumor heterogeniteit vast te leggen.

Multiparametrische tumor organoïde drug screening met behulp van Widefield Live-Cell Imaging voor bulk en single-organoïde analyse

We bieden een uitgebreid overzicht en verfijning van bestaande protocollen voor de vorming van hepatocellulair carcinoom (HCC), die alle stadia van de organoïdeteelt omvatten. Dit systeem dient als een waardevol model voor de identificatie van potentiële therapeutische doelwitten en de beoordeling van de effectiviteit van kandidaat-geneesmiddelen.

Ontwikkeling en optimalisatie van een humaan hepatocellulair carcinoom-patiënt-afgeleid organoïdemodel voor potentiële doelidentificatie en ontdekking van geneesmiddelen

Hier introduceren we een uitgebreid protocol voor het genereren en stroomafwaarts analyseren van menselijke hersenorganoïden met behulp van single-cell en single-nucleus RNA-sequencing.

Generatie en stroomafwaartse analyse van single-cell en single-nuclei transcriptomen in hersenorganoïden

Organoïden die worden gegenereerd uit tumoren van patiënten worden orthotopisch in de lever van de muis geïnjecteerd. De resectie van niet-tumorachtig leverweefsel leidt tot een regeneratieve omgeving in het leverweefsel waar de tumor zich bevindt.

Een van patiënten afgeleide organoïde xenotransplantaatmodel voor hepatocellulaire kanker om de impact van leverregeneratie op tumorgroei te onderzoeken

De recellulariseerde extracellulaire matrix van een decellulaire rattenlever kan worden gebruikt als een gehumaniseerd, driedimensionaal ex vivo model om de distributie en transgenexpressie van een virus of vireel vector te bestuderen.

Studie van virale vectoren in een drie-dimensionale lever Model herbevolkt met de menselijke hepatocellulair carcinoom cellijn HepG2

Over een breed scala van indicaties van de ziekte, meer fysiologisch relevante modellen worden ontwikkeld en uitgevoerd in drug discovery-programma's. Het nieuwe modelsysteem hier beschreven demonstreert hoe driedimensionale tumor spheroïden kunnen worden gekweekt en vertoond in een high-throughput 1536-well plaat-gebaseerd systeem om te zoeken naar nieuwe oncologie drugs.

Generatie van High-Throughput driedimensionale Tumor spheroïden voor Drug Screening

Hier presenteren we een reproduceerbare methode voor het ontwikkelen van een model orthotopic lymfkliertest van hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom. Tumoren tonen klinisch relevante histopathologische kenmerken van de ziekte, met inbegrip van necrose, arme differentiatie, knooppunten metastasen en immuun infiltratie. Tumor-dragende muizen ontwikkelen klinisch relevante symptomen zoals dysfagie, verplaatsing van de kaak en gewichtsverlies.

Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling

Transarteriële chemoembolisatie (TACE) is de standaardtherapie voor patiënten in het tussenstadium van hepatocellulair carcinoom en wordt meestal uitgevoerd via femurslagadertoegang. In vergelijking met transfemorale toegang kan transradiale toegang (TRA) de snelheid van bloedingscomplicaties verminderen en de tolerantie van de patiënt verbeteren. Hier wordt een methode gepresenteerd om transarteriële chemoembolisatie uit te voeren via radiale slagadertoegang.

Transradiale toegang chemoembolisatie voor hepatocellulair carcinoom patiënten

Intrinsiek ongeordende domeinen zijn belangrijk voor de functie van de oncogene fusietranscriptiefactor. Om deze eiwitten therapeutisch te targeten, is een meer gedetailleerd begrip van de regulerende mechanismen die door deze domeinen worden gebruikt, vereist. Hier gebruiken we transcriptomics om belangrijke structurele kenmerken van het intrinsiek ongeordende EWS-domein in Ewing-sarcoom in kaart te brengen.

Het in kaart brengen van de structuur-functierelaties van ongeordende oncogene transcriptiefactoren met behulp van transcriptomische analyse

Hier presenteren we hoe we een niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) -geassocieerd Hepatocellulair Carcinoom (HCC) zebravismodel kunnen genereren om de impact van cholesteroloverschot op de micro-omgeving van de lever en het immuuncellandschap te bestuderen.

Analyse van levermicro-omgeving tijdens vroege progressie van niet-alcoholische leververvetting-geassocieerd hepatocellulair carcinoom bij zebravissen

Ontdek een gestandaardiseerde workflow voor het genereren van hepatocellulaire carcinoomorganoïden, medicamenteuze behandeling met lenvatinib en eencel-RNA-sequencing. Deze methode analyseert transcriptomische veranderingen voor en na behandeling.

Generatie en eencel-transcriptomische analyse van hepatocellulaire carcinoomorganoïden na medicamenteuze behandeling

Meer video's verkennen