Pobieranie szpiku kostnego z tylnej kończyny myszy

- Szpik kostny to gąbczasta galaretowata tkanka znajdująca się w pustym środku kości. Zawiera hematopoetyczne komórki macierzyste, które wytwarzają komórki krwi, kluczowy składnik układu odpornościowego. Izolacja szpiku kostnego od większych kości, takich jak kość udowa i piszczelowa, zapewnia wysoką wydajność komórek.

Aby pobrać szpik kostny, umieść uśpioną mysz w pozycji leżącej na plecach i wysterylizuj skórę za pomocą etanolu. Przetnij jamę brzuszną i usuń skórę, aby odsłonić tylne kończyny. Złam kość piszczelową, długą kość nogi, i umieść ją w zimnym PBS, aby utrzymać warunki fizjologiczne. Zwichnij rzepkę i usuń mięśnie, aby odsłonić kość udową, kość udową.

Odetnij kość udową od spodu kości i umieść w zimnym PBS. Wybij otwór w probówce do mikrowirówek o mniejszej objętości i umieść w niej obie kości tak, aby kości były otwarte skierowane w stronę otworu. Umieść probówkę zawierającą kości w probówce do mikrowirówek o większej objętości i odwiruj dwuwarstwowe probówki w celu osadzenia szpiku kostnego. Pobrany szpik kostny należy wykorzystać do dalszej analizy. W tym protokole pobierzemy szpik kostny z tylnych kończyn myszy.

- W celu pobrania szpiku kostnego umieść 6-10-tygodniową mysz C57 black-6 w pozycji leżącej na sterylnej podkładce chirurgicznej i użyj 70% etanolu do sterylizacji brzucha i tylnych kończyn. Użyj nożyczek chirurgicznych do preparowania, aby otworzyć jamę brzuszną i usunąć skórę, aby odsłonić tylne kończyny. Używając pary kleszczy opatrunkowych z końcówką, przytrzymaj piszczel myszy tuż poniżej kostki i użyj pary zakrzywionych kleszczy opatrunkowych, aby ustabilizować kość piszczelową poniżej kleszczy opatrunkowych z końcówką.

Użyj kleszczy opatrunkowych z końcówką, aby złamać kość piszczelową i usunąć mięsień, aby odsłonić kość, przed umieszczeniem kości piszczelowej w zimnym PBS. Przesuń stabilizujące zakrzywione kleszcze opatrunkowe do kości udowej i wsuń kleszczyki opatrunkowe z końcówką poniżej stawu kolanowego, aby przytrzymać rzepkę. Delikatnie pociągnij do góry, aby zwichnąć rzepkę i usuń mięsień z rzepki, aby odsłonić kość udową. Przytrzymaj odsłoniętą kość udową za zakrzywione kleszcze opatrunkowe i użyj nożyczek chirurgicznych, aby przeciąć kość udową od spodu kości. Następnie umieść kość udową w PBS.

Następnie użyj igły o rozmiarze 18, aby wybić otwór w probówce mikrowirówki o pojemności 0,5 mililitra i umieść obie kości w probówce tak, aby otwarte końce kości były skierowane w dół do otworu. Umieść 0,5-mililitrową probówkę w 1,7-mililitrowej probówce do mikrowirówki i odwiruj dwuwarstwowe probówki w mikrowirówce. Pod koniec wirowania potwierdzić, że szpik kostny został wyekstrahowany na dno probówki.