JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:28 min. • September 26th, 2025
Zacznij od uśpionej larwy danio pręgowanego z jelitem zakażonym przez Clostridioides difficile, patogenną bakterię beztlenową.
Zabezpiecz górny grzbietowy pień larwy i usuń jej głowę, aby odsłonić narządy wewnętrzne.
Zabezpiecz środkowy grzbiet pnia i delikatnie odizoluj jelito od jamy ciała.
Przenieść wyizolowane jelito do probówki mikrowirówkowej zawierającej bufor.
Homogenizuj jelito za pomocą tłuczka, aby rozbić tkankę i uwolnić drobnoustroje jelitowe.
Przenieść homogenat do probówki zawierającej selektywne podłoże hodowlane uzupełnione antybiotykami.
Inkubować homogenat w komorze beztlenowej.
Warunki beztlenowe hamują rozwój bakterii tlenowych, podczas gdy antybiotyki są ukierunkowane na rozwój natywnych beztlenowych drobnoustrojów jelitowych i hamują ich wzrost.
Clostridioides difficile jest odporny na te antybiotyki i namnaża się w warunkach beztlenowych.
Składniki odżywcze i czynniki wzrostu w pożywce hodowlanej dodatkowo sprzyjają podziałowi komórek, umożliwiając wzrost żywotnych Clostridioides difficile.
Po eutanazji zakażonych larw danio pręgowanego wbij igłę w grzbietowy pień larw danio pręgowanego w pobliżu głowy, aby unieruchomić danio pręgowanego. Usuń głowę za skrzelami za pomocą lancetu.
Włóż drugą igłę w środek tułowia grzbietowego. Wbij trzecią igłę w brzuch danio pręgowanego i wyciągnij jelito z jamy ciała. Użyj igły do mikroiniekcji, aby przenieść 10 do 15 jelit do 1,5-mililitrowej probówki zawierającej 200 mikrolitrów sterylnego 1X PBS.
Homogenizuj jelita za pomocą tłuczka, aby rozbić tkankę i przygotować homogenaty. Upewnij się, że tłuczek dotrze do dna probówki, aby całkowicie rozbić wszystkie jelita. Do homogenatów dodać pożywkę hodowlaną Clostridioides difficile zawierającą D-cykloserynę i cefoksytynę, z taurocholanem lub bez, i inkubować w komorze beztlenowej.