JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:08 min. • September 26th, 2025
Weź gradientową płytkę roju z dwuwarstwowym agarem. Dolną warstwę, zawierającą inhibitor, wylano w celu wytworzenia gradientu inhibitora.
Płyta zawiera izometrycznie rozmieszczone studzienki, aby zapewnić odpowiednią przestrzeń dla roju bakterii lub migracji zbiorowej, zapobiegając nakładaniu się roju.
Zaszczep studzienki kulturą bakteryjną i inkubuj płytkę.
Przy niskich stężeniach inhibitorów bakterie koordynują swój ruch wiciowy, inicjując zbiorową migrację lub rój.
Przy wysokich stężeniach inhibitora inhibitor hamuje ekspresję genów związanych z wiciami.
Powoduje to ograniczony ruch wiciowców, co prowadzi do ograniczonej ruchliwości roju.
Sfotografuj płytę w białym świetle w regularnych odstępach czasu, aby uchwycić wzór roju.
Podczas obrazowania dostosuj czas ekspozycji, aby zwiększyć jasność rojów.
Zmodyfikuj ustawienia progu, aby zminimalizować zakłócenia światła tła i zwiększyć kontrast.
Zapisz obraz do późniejszej analizy wpływu stężenia inhibitora na roj bakterii.
Dodaj 80 mikrolitrów nocnej kultury wzrostu do każdej studzienki. Płytki roju należy wyjmować z inkubatora pojedynczo co 12 godzin i umieszczać je w systemie obrazowania żelu.
Wybierz tryb obrazowania żelowego, wystaw płytkę roju na działanie białego światła i dostosuj ogniskową, aby uzyskać wyraźny widok rojów. Zwiększ jasność rojów, aby uzyskać precyzyjną obserwację, dostosowując czas ekspozycji do 300 milisekund. Dostosuj próg, aby zminimalizować zakłócenia powodowane przez światło tła.
Zapisz plik obrazu do dalszej analizy.