JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:28 min. • October 30th, 2025
Zacznij od szklanego naczynia nakrywkowego wysianego kokulturą znakowanych fluorescencyjnie bakterii ruchliwych i nieoznakowanych bakterii nieruchliwych.
Weź naczynie zawierające wacik agarozowy z dodatkiem składników odżywczych i ostrożnie usuń otaczającą silikonową pleśń.
Przechyl naczynie i za pomocą wygiętej szpatułki wsuń się pod krawędź podkładki. Następnie umieść go na pokrywce płytki Petriego.
Przenieś podkładkę dolną stroną do dołu do naczynia zawierającego komórki bakteryjne, aby zapewnić równomierny kontakt z warstwą bakteryjną.
Delikatnie dociśnij podkładkę, aby wyeliminować wszelkie pęcherzyki powietrza.
Umieść wstępnie zwilżone chusteczki wokół krawędzi naczynia, aby utrzymać wilgotność.
Pod odwróconym mikroskopem śledź zachowanie bakterii w określonym czasie.
W miarę wzrostu bakterii nieruchliwe bakterie uwalniają chemiczne atraktanty. Ruchliwe bakterie wyczuwają te sygnały i przemieszczają się w kierunku nieruchliwych kolonii bakteryjnych.
Z biegiem czasu ruchliwe bakterie gromadzą się i atakują nieruchome kolonie bakteryjne, potwierdzając interakcje bakteryjne.
Gdy płatki wyschną, odpipetuj jeden mikrolitr kokultury równomiernie na dnie wstępnie podgrzanego, sterylnego 35-milimetrowego szklanego naczynia nakrywkowego.
Usuń silikonowe wycięcie z formy agarozy za pomocą sterylnej pęsety, przechyl je na bok i wsuń lekko wygiętą szpatułkę pod krawędź podkładki agarozowej, aby upuścić ją na sterylną pokrywkę płytki Petriego.
Przenieś podkładkę do naczynia z komórkami bakteryjnymi, dolną stroną do dołu, wsuwając szpatułkę pod kątem 90 stopni pod podkładkę i umieszczając ją na zaszczepionym szkiełku nakrywkowym. Użyj szpatułki, aby podkładka przylegała do szkiełka nakrywkowego i delikatnie wyciśnij wszelkie pęcherzyki powietrza.
Usuń nadmiar wilgoci z wilgotnej chusteczki i umieść ją wokół krawędzi naczynia, upewniając się, że nie dotyka podkładki. Próbka jest teraz gotowa do obrazowania.