Ocena wpływu pożytecznych bakterii na translokację mikrobiologiczną jelit u szczurów narażonych na stres cieplny

Zacznij od szczura doświadczalnego wstępnie potraktowanego pożytecznymi bakteriami i szczura kontrolnego, któremu podawano sól fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS.

Wystaw oba szczury na działanie wysokich temperatur, aby wywołać stres fizjologiczny.

U szczura kontrolnego stres cieplny przerywa barierę nabłonka jelitowego, umożliwiając bakteriom pochodzącym z jelit przemieszczanie się i rozprzestrzenianie się do narządów wewnętrznych.

Jednak u szczurów doświadczalnych pożyteczne bakterie uwalniają cząsteczki sygnałowe, które zachowują połączenia nabłonkowe i zmniejszają translokację bakterii.

Pobrać probówki zawierające próbki wątroby pobrane od każdego szczura.

Dodaj PBS i homogenizuj próbki, aby uwolnić bakterie do buforu.

Rozprowadzić rozcieńczony homogenat na bogatych w składniki odżywcze płytkach agarowych.

Inkubuj płytki, aby umożliwić utworzenie kolonii bakterii. Następnie policz kolonie.

Wyższa liczba kolonii w próbie kontrolnej wskazuje na przerwanie bariery jelitowej i translokację bakteryjną.

Natomiast mniejsza liczba kolonii w próbce eksperymentalnej wskazuje na wpływ pożytecznych bakterii na ograniczanie translokacji bakterii do jelit.

Po leczeniu szczurów przez zgłębnik doustny B.subtilis BSB3 lub PBS przez dwa dni, a następnie podziale zwierząt i zmierzeniu im temperatury, należy trzymać szczury z grupy pierwszej i drugiej w temperaturze pokojowej przez 25 minut. Umieść zwierzęta z grupy trzeciej i czwartej w komorze klimatycznej o temperaturze 45 stopni Celsjusza i wilgotności względnej 55% na 25 minut.

Następnie, po eutanazji zwierząt, pobraniu krwi z tułowia i wyizolowaniu narządów zgodnie z protokołem tekstowym, dodaj sterylny PBS do każdej probówki, aby uzyskać rozcieńczenie próbki od 1 do dziesięciu wagowych na objętość i użyj sterylnego homogenizatora tkanek szklanych do wytworzenia jednorodnych zawiesin tkankowych.

Następnie użyj sterylnego PBS, aby wykonać seryjne rozcieńczenia każdej próbki. Następnie rozłóż 0,1 mililitra wszystkich rozcieńczeń na powierzchni agaru MacConkey's i 5% krwi oraz agaru z krwią Brucella z heminą i witaminą K1. Po inkubacji płytek użyj licznika kolonii, aby policzyć kolonie na każdej grupie płytek.