JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:28 min. • November 28th, 2025
Weźmy roślinę Arabidopsis z liśćmi wcześniej zaszczepionymi bakteriami, aby zbadać interakcje roślin-mikroorganizmy.
Bakterie te rozmnażają się w apoplastach, czyli przestrzeni międzykomórkowej między komórkami roślinnymi, tworząc mikrokolonie.
Gdy kolonizacja apoplastyczna zostanie ustalona, usuń liście i umieść je w bezigłowej strzykawce.
Dodaj wodę destylowaną, aby pokryć tkankę.
Włóż tłok, następnie trzymaj strzykawkę pionowo, stuknij w nią i wyreguluj tłok, aby uwolnić uwięzione powietrze.
Uszczelnij końcówkę parafilmem, aby stworzyć zamkniętą komorę do ekstrakcji apoplastów.
Należy przystosować dodatnie ciśnienie, naciskając tłok, aż tkanka stanie się ciemna, co oznacza ucisk i przedostanie się wody do przestrzeni międzykomórkowej, aby usunąć bakterie.
Następnie przystosuj podciśnienie, pociągając tłok, aby rozszerzyć matrycę tkanek i wyciągnąć płyn oraz bakterie.
Powtarzaj cykle ciśnienia, aby wygenerować siły ścinające, które zakłócają mikrokolonie, uwalniając bakterie bez uszkadzania tkanek roślinnych.
Odszczelnij strzykawkę i pobierz płyn apoplastyczny zawierający rozproszone bakterie do dalszej analizy.
Cztery dni po szczepieniu odetnij albo część powietrzną rośliny Arabidopsis , albo zaszczepiony liść fasoli i umieść go w strzykawce 20-mililitrowej bez igły.
W przypadku liści fasoli zwij liść na siebie, pozostawiając powierzchnię odbłokową na zewnątrz. Dodaj tyle wody, by pokryć tkankę. Następnie włóż tłok utrzymujący strzykawkę w pozycji pionowej i usuń nadmiar powietrza oraz pęcherzyki powietrza z wnętrza strzykawki, delikatnie stukając w lufę, aż całe powietrze znalazło się blisko końcówki, a po usunięciu powietrza przykryj końcówkę lufy strzykawki filmem parafinowym.
Teraz ostrożnie naciśnij tłok, aby wygenerować dodatnie ciśnienie, aż tkanka stanie się ciemniejsza. Następnie pociągnij tłok, aby wygenerować podciśnienie. Usuń folię parafinową i tłok i zbierz płyn zawierający bakterie ekstrakcyjne apoplastem.