JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:18 min. • January 30th, 2026
Zacznij od znieczulonych, przezroczystych, transgenicznych zarodków danio danio ekspresyjnie znakowanych makrofagów.
Zarodki są wstępnie wstrzykiwane do mięśnia ogona fluorescencyjnym naprężeniem Mycobacterium abscessus , aby wywołać miejscową infekcję.
Brak powierzchniowych glikopeptydolipidów w tych bakteriach sprzyja ich agregacji.
Unieruchom zarodki w agarozie o niskiej temperaturze topnienia i ukierunkuj je tak, aby odsłonić miejsce zakażenia.
Gdy agaroza się zastygnie, dodaj wodę rybną zawierającą środek znieczulający, aby utrzymać znieczulenie i zapobiec odwodnieniu.
Monitoruj infekcję w czasie rzeczywistym za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.
Po zakażeniu endogenne makrofagi migrują w kierunku bakterii i fagocytozą pojedynczych komórek.
Jednak niektóre bakterie tworzą struny — wydłużone agregaty zewnątrzkomórkowe, które replikują się, rozprzestrzeniają i opierają się fagocytozie, powodując śmierć komórek gospodarza i infiltrację immunologiczną.
Mimo to komórki odpornościowe nie eliminują tych sznurów, co pozwala bakteriom i martwym komórkom gospodarza gromadzić się i tworzyć ropień.
To ujawnia przewody jako klucz M. Strategia unikania odporności ropnia .
Do obrazowania na żywo zakażenia M. ropnia , umieszczaj znieczulone zarodki tricaine w agarozze o niskiej temperaturze topnienia 1% w 35-milimetrowej szalce Petriego o szklanym dnie dla mikroskopu odwróconego lub w pojedynczym szkiełku wgłębiającym do mikroskopii konfokalnej w pozycji pionowej. Ukierunkuj zarodek w pożądanej pozycji i pokryj stwardniałą agarozę wodą rybą zawierającą tricainę. Na koniec użyj mikroskopu fluorescencyjnego z obiektywem 10X lub mikroskopu konfokalnego fluorescencyjnego z obiektywami 40X lub 63X do sekwencyjnego pozyskiwania fluorescencji i obrazowania transmisyjnego zarodka.