JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 3:17 min. • March 31st, 2026
Zacznij od Streptococcus pneumoniae hodowanego w biofilmie, bezobjawowego kolonizatora nosowo-gardła, zawieszonego w buforze
Podawaj zawiesinę downętrznie myszy bez znieczulenia, umożliwiając wdychanie do górnych dróg oddechowych.
W nabłonku nosowogardłowym bakterie tworzą biofilm, który ułatwia kolonizację i hamuje produkcję cytokin przeciwwirusowych przez komórki gospodarza.
Po znieczuleniu wyprostuj język myszy, aby uzyskać dostęp do tchawicy.
Podawaj wirusa grypy A do tchawicy, aby zainfekować dolne drogi oddechowe.
Po wyzdrowieniu myszy natychmiast zaszczepić wirusa donosowo, aby zaatakować górne drógi oddechowe.
Infekcja wirusowa zaburza układ odpornościowy gospodarza i uszkadza tkankę śluzową, wywołując rozprzestrzenianie się bakterii do dolnych dróg oddechowych.
W środowisku płuc zmienionym przez wirusa bakterie przechodzą w inwazyjne patogeny, wywołując stan zapalny płuc i rozprzestrzenianie się ogólnoustrojowo.
Infekcja hamuje również funkcję neutrofili, zmniejszając usuwanie bakterii.
Ten model współinfekcji umożliwia badanie interakcji gospodarz-mikroorganizmy.
Rozmroz biofilm wyhodowany aliquot na lodzie i obróć się z 1700 g przez pięć minut. Ostrożnie usuń i wyrzuć supernatant, nie zakłócając osadu. Następnie myj granulat, ponownie zawieszając go w 1 mililitrze PBS i ponownie go zawiruj. Usuń supernatant i ponownie zawiesij pellet w objętości potrzebnej do osiągnięcia pożądanego stężenia.
Zaszczepić czarnego sześciu samców myszy C57 downętrznie z 5 razy 10 do szóstej jednostki tworzącej kolonię (CFU), pipetując 5 mikrolitrów rozcieńczonego inokulum do każdego naris. Po zaszczepieniu trzymaj mysz mocno, stabilizując głowę aż do wdychania objętości. Po rozmrożnięciu wirusa rozcieńcz go w PBS do pożądanego stężenia.
Nałóż oczy na oczy myszy przed znieczuleniem. Natychmiast zainfekowaj znieczuloną mysz 50 mikrolitrami 20 jednostek tworzących płytki nazębne (PFU) wirusa grypy A lub IAV dotrachealnie, używając tępych pęset, aby wyciągnąć język z ust i pipetować objętość płynu w dół tchawicy. Po wyzdrowieniu należy donosowo zaszczepić 10 mikrolitrów 200 PFU IAV metodą inokulacji opisaną wcześniej.