Wykrywanie patogenów przenoszonych przez żywność na podstawie wzbogaconych próbek much na PCR

Umieść rurki łańcuchowe reakcji polimerazowej lub PCR zawierające tabletki gotowe do PCR, specyficzne dla docelowych patogenów przenoszonych przez żywność, na schłodzonym stojaku PCR.

Każda tabletka zawiera zapalniki specyficzne dla celu, polimerazę DNA, dNTP oraz barwnik fluorescencyjny stosowany w reakcji PCR.

Dodaj wzbogacony lizat muchy zawierający dużą ilość DNA bakterii patogennych, aby utworzyć mieszaninę reakcji.

Uszczelnij rurki za pomocą okrętów optycznych, aby zapobiec parowaniu.

Załaduj rurki PCR do cyklera termicznego i wykonuj oddzielne testy PCR za pomocą programów specyficznych dla patogenu dla każdego patogenu docelowego.

Podczas PCR DNA ulega denaturacji, startery wiążą się z docelową sekwencją, a amplifikacja wytwarza dwuniciowe DNA, które wiąże barwnik i emituje fluorescencję.

Powtarzające się cykle prowadzą do wykładniczego powiększenia DNA i zwiększenia fluorescencji.

Instrument śledzi fluorescencję w czasie rzeczywistym, aby wykryć obecność docelowych patogenów przenoszonych przez żywność w próbce.

Aby rozpocząć wykrywanie na podstawie PCR, najpierw schłodź stojak z rurkami PCR na bloku chłodzącym. Następnie umieść odpowiednie probówki PCR zawierające tabletki gotowe do PCR dla docelowego patogenu przenoszonego przez żywność do uchwytu.

Ostrożnie wyjmij kapsułki z rurek PCR narzędziem do dekapowania i wyrzuć je. Sprawdź, czy każda probówka zawiera tabletkę. Następnie przelej 50 mikrolitrów lizatu do odpowiednich rurek PCR.

Przymocuj nowe nakręcone okładki optyczne na rurkach PCR za pomocą narzędzia do zakręcania. Po złożeniu reakcji załaduję lampy PCR do systemu detekcji cyklera PCR. Następnie uruchom program i zobacz wyniki zgodnie z protokołem producenta.