JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Microbiology
0 wyświetleń • 2:56 min. • February 26th, 2026
Zacznij od wielowarstwowej płytki zawierającej paramecje wcześniej zakażone patogennym E. coli ekspresującymi białka fluorescencyjne.
Dodaj znieczulone larwy danio pręgowanego i współwysiądź je w warunkach dziennych, aby naśladować naturalne środowisko żerowania.
Podczas inkubacji larwy odzyskują przytomność i polują na zakażone paramecje.
Po spożyciu paramecje są trawione, uwalniając E. coli do przewodu jelitowego.
Kolonizacja bakteryjna przechodzi z jelita przedniego do tylnego jelita, naśladując infekcję przenoszoną przez żywność.
Następnie przemyj larwy w podłożu z dodatkiem środka znieczulającym, aby je ponownie znieczulić.
Następnie umieść larwy w agarozie o niskiej temperaturze topnienia na płycie obrazowania fluorescencyjnej.
Za pomocą stereomikroskopu ustaw danio pręgowanego i wysiabuj jądro, aby umożliwić agarozę stwardnienie.
Nałóż bogaty w składniki odżywcze podłoże uzupełniony środkiem znieczulającym.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego obserwuj larwy pod kątem rozmieszczenia fluorescencyjnej E. coli , aby ocenić postęp infekcji bakteryjnej
W przypadku infekcji przenoszonej przez żywność danio pręgowanego rozcieńcz próbki paramecji do dwukrotnie dziesięć do pięciu paramecji na mililitr stężenia E3 i dodaj 3 mililitry każdej kultury paramecji do jednego dołku z płytką 6-dołową na każdy stan.
Następnie przenieś 10 znieczulonych danio pręgowanych do każdego dołku w minimalnej ilości płynu i inkubuj współkultury przez dwie godziny w temperaturze 30 stopni Celsjusza w inkubatorze dziennym w warunkach dziennych.
Po zakończeniu inkubacji myj danio pręgowanego w 5 różnych dołkach zawierających 3 mililitry świeżego medium E3 z dodatkiem 100 miligramów na litr tricainy na dołek i umieść każdą danio w 3 mililitrach 1% niskotopnionej agarozy w czarnościennej płycie z 6 dołkami.
Gdy wszystkie ryby zostaną osadzone, umieść płytkę pod mikroskopem stereo i użyj przyciętej żelowej końcówki ładowającej, aby upewnić się, że głowice są po lewej, a ogony po prawej stronie w każdym polu widzenia.
Poczekaj 5 minut, aż agaroza się zastygnie, następnie nałóż świeże medium E3 z trikainą i obrazuj danio pręgowanego pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby ocenić postęp infekcji bakteryjnej.