Opracowanie modelu infekcji larw danio pręgowanego z wykorzystaniem mikrogawage

Weź znieczuloną larwę danio pręgowanego w rowku agarozowej pleśni. Głowa jest ułożona pod kątem dla dostępu jelitowego podczas wstrzykiwania.

Przykryj ją agarozą o niskim stopniu topnienia, a następnie pozwól agarozie stwardnieć i unieruchomić larwę.

Weź mikroiniekcyjną igłę zawierającą bakterie patogenne zawieszone w roztworze barwnika śledzącym.

Pod stereomikroskopem ustaw igłę pod kątem i prowadź igłę przez agarozę do jamy ustnej larwy.

Przesuwaj ją przez rurkę pokarmowę do jelita.

Wstrzyknij bakterie do światła jelit i potwierdź podanie za pomocą barwnika znacznika. Ta nieinwazyjna metoda, zwana mikrogavage, naśladuje naturalną drogę infekcji.

Wyciągnij igłę. Pokrój agarozę i przełóż larwę do świeżego podłoża.

Bakterie rozmnażają się i uwalniają toksyny, które uszkadzają nabłonek jelit, sprzyjając inwazji i kolonizacji bakterii w głębszych tkankach.

Model infekcji danio dano jest gotowy do analizy.

W płytce agarozowej o 1,5% z rowkami umieść kroplę 0,8% niskotopniącej agarozy na larwy danio pręgowanego, aby ją przykryć.

Delikatnie ustawiaj larwy tak, że głowy są ustawione pionowo pod kątem 45 stopni w rowku, a ogony przylegają do ściany rowka. Delikatnie przeprowadź igłą przez agarozę, następnie do pyska larw danio pręgowanego i przez przełyk. Gdy czubek igły znajduje się wewnątrz przedniej opuszki jelita, naciśnij pedał wstrzykiwania, aby uwolnić 0,5 do 1 nanolitra kultury bakterii.

Wypełnij światło jelita. Nie pozwól, by przelew się z przełyku lub kloaki. Delikatnie wyciągnij igłę z pyska danio pręgowanego. Po odcięciu ratuj zakażone larwy danio pręgowanego przed agarozą za pomocą elastycznego końcówki mikroładowaczowej, najpierw odcinając agarozę, a następnie podnosząc larwy.