Generowanie modelu infekcji dróg moczowych: technika podawania bakterii uropatogennych u myszy w celu opracowania modelu infekcji dróg moczowych

Zakażenie dróg moczowych lub ZUM jest spowodowane przede wszystkim kolonizacją uropatogennych bakterii E. coli w nerkach, moczowodach, pęcherzu moczowym lub cewce moczowej.

Aby wygenerować mysi model UTI, zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy w pozycji leżącej. Za pomocą mikroskopu stereoskopowego wizualizuj dolną część brzucha myszy, aby zlokalizować ciemnoróżowy otwór cewki moczowej.

Teraz weź strzykawkę zawierającą pożądany uropatogenny roztwór bakteryjny z przymocowaną do niego końcówką angiocewnika. Wprowadzić cewnik prostopadle do cewki moczowej. Przechylić strzykawkę, aby ustawić ją poziomo, a następnie popchnąć ją dalej, aż dotrze do pęcherza moczowego.

Następnie powoli wkraplaj inokulum bakteryjne do pęcherza. Utrzymuj strzykawkę i cewnik na miejscu przez pożądany czas, aby zapobiec wyciekowi. Powoli wycofaj cewnik z cewki moczowej i pozwól bakteriom się namnażać.

Po dostaniu się do środka populacja bakterii atakuje powierzchowne komórki nabłonka pęcherza moczowego, gdzie replikują się, tworząc wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne lub IBC w cytoplazmie tych komórek.

W końcu bakterie te uwalniają się do światła pęcherza, gdzie infekują pobliskie komórki, powodując rozprzestrzenianie się infekcji.

Mysi model UTI jest teraz gotowy do dalszej analizy.

Zamontuj sterylną końcówkę angiocewnika o rozmiarze 24 na strzykawce o pojemności 100 mikrolitrów. Napełnić strzykawkę przygotowanym roztworem bakteryjnym. Umieścić jedno zwierzę na powierzchni roboczej w pozycji leżącej na plecach i utrzymywać stabilne znieczulenie izofluranem, używając stożka nosowego podczas wkraplania. Nałóż maść na oczy. Wydal zalegający mocz, delikatnie uciskając i wykonując okrężne ruchy w okolicy nadłonowej. Następnie oczyść dolną część brzucha 70% etanolem.

Nasmaruj końcówkę cewnika zwykłą solą fizjologiczną. Połóż palec wskazujący ręki niedominującej na brzuchu i delikatnie popchnij go do góry. Rozpocznij cewnikowanie cewki moczowej pionowo pod kątem 90 stopni. Po napotkaniu oporu przechyl go w poziomie przed dalszym wkładaniem. Wykonaj powolne wkraplanie 50 mikrolitrów inokulum bakteryjnego. Po zakropleniu należy przytrzymać strzykawkę i cewnik na miejscu jeszcze przez kilka sekund, a następnie powoli wycofać się, aby zapobiec wyciekowi.