JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunology
0 wyświetleń • 4:50 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz z niedoborem odporności z wszczepionym ludzkim guzem mózgu.
Usuń sierść z miejsca operacji i zdezynfekuj. Nałóż maść na oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.
Umieść mysz na ramce stereotaktycznej z poduszką grzewczą, aby utrzymać temperaturę ciała.
Wykonaj nacięcie na skórze głowy, odsłaniając czaszkę.
Zlokalizuj bregmę, punkt orientacyjny na czaszce, i określ miejsce wstrzyknięcia, aby umieścić nad nim mikrostrzykawkę.
Mikrostrzykawka zawiera zawiesinę efektorowych limfocytów T specyficznych dla nowotworu od zdrowych dawców ludzkich.
Utworzyć otwór w miejscu wstrzyknięcia na czaszce, unikając uszkodzenia mózgu. Wstrzyknij igłę do mózgu i powoli uwalniaj efektorowe limfocyty T w miejscu guza.
Częściowo wyjąć igłę i utrzymać ją na miejscu, zapobiegając wyciekowi wstrzykniętych komórek, przed całkowitym wyjęciem igły.
Zamknij nacięcie i pozwól myszy dojść do siebie.
Upewnij się, że zwierzę jest odpowiednio znieczulone przez uszczypnięcie palca u nogi, a następnie usuń sierść z miejsca operowanego między uszami i aż do nosa. Ponownie zawieszaj komórki powoli, aby zapobiec zbrylaniu się komórek, i załaduj zawiesinę ogniw do strzykawki z dużą ostrożnością, aby uniknąć obecności pęcherzyków.
Następnie umieścić strzykawkę w przystosowanej pompie strzykawkowej. Zdezynfekuj miejsce operacyjne wacikiem nasączonym 5% roztworem jodu powidonu i umieść smarującą maść okulistyczną w oczach myszy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Następnie umieść znieczuloną mysz na ramie stereotaktycznej na ciepłym bloku izotermicznym. Odpowiednio ustaw nos i zęby myszy nad listwą zębatą. Mocno dokręć nauszniki w uszach myszy, aby unieruchomić głowę. Uważaj, aby nie uszkodzić błony bębenkowej.
Ogranicz oddychanie i upewnij się, że głowa jest dobrze unieruchomiona. Wykonaj strzałkowe nacięcie skóry w linii środkowej sterylnymi nożyczkami wzdłuż górnej części czaszki, aby odsłonić czaszkę. Zidentyfikuj przecięcie struktur strzałkowych i czołowych, które mają służyć jako punkty orientacyjne dla lokalizacji stereotaktycznej, i umieść strzykawkę powyżej tego punktu.
Przesunąć strzykawkę o 2 milimetry w bok i 0,5 milimetra w głąb bregmy. Za pomocą mikrowiertła wykonaj mały otwór w czaszce sterylnym wiertłem. Uważaj, aby pozostać powierzchownym, aby uniknąć uszkodzenia mózgu.
Ostrożnie włożyć strzykawkę do wywierconego otworu. Przesuwać igłę powoli do przodu o 3 milimetry w dół opony twardej, a następnie do tyłu o 0,5 milimetra do końcowej głębokości 2,5 milimetra przed wstrzyknięciem.
Uruchom wstrzykiwanie komórek z prędkością 2 lub 3 mikrolitrów na minutę i monitoruj myszy przez cały czas wstrzykiwania. Po zakończeniu wstrzykiwania należy pobrać igłę na zaledwie 1 milimetr i przytrzymać strzykawkę na miejscu przez dodatkową minutę, a następnie powoli całkowicie wyjąć strzykawkę, aby zapobiec wyciekowi z miejsca infuzji. Ostrożnie wyjmij zwierzę z ramy stereotaktycznej.
Zamknij skórę odpowiednim szwem chirurgicznym i nałóż 2% żel lidokainowy bezpośrednio na ranę. Przenieś znieczuloną mysz do odpowiedniej klatki nad poduszką grzewczą ustawioną na 37 stopni Celsjusza, aby utrzymać odpowiednią temperaturę ciała myszy do pełnego wyzdrowienia ze znieczulenia.