JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunology
0 wyświetleń • 2:25 min. • July 8th, 2025
Pobrać szkiełko wielodołkowe zawierające monowarstwy mikrogleju.
W studzience testowej pokryj komórki β-glukanem. W studzience kontrolnej brakuje β-glukanu. Inkubować.
W dołku testowym β-glukany, wzorce molekularne związane z patogenami, wiążą się ze specyficznymi receptorami na mikrogleju, powodując fagocytozę β-glukanu.
To aktywuje mikroglej, wytwarzając i uwalniając bioaktywne cząsteczki, takie jak reaktywne utleniacze i cytokiny do pożywki.
Zbierz pożywkę zawierającą bioaktywne cząsteczki ze studzienek i przefiltruj je w celu usunięcia zanieczyszczeń i β-glukanu.
Zamrozić pożywkę w niskich temperaturach, aby zachować aktywność biologiczną cząsteczek bioaktywnych.
Następnie rozmrozić i dodać pożywkę do szkiełka wielodołkowego zawierającego monowarstwy komórek raka mózgu. Inkubować.
Bioaktywne cząsteczki uruchamiają szlaki sygnalizacji komórkowej, zmniejszając proliferację komórek rakowych i indukując apoptozę.
Zmniejszona proliferacja komórek rakowych i zwiększona apoptoza sugerują, że β-glukany są środkami promującymi właściwości przeciwnowotworowe mikrogleju przeciwko komórkom raka mózgu.
Aktywuj mikroglej, pokrywając komórki mikrogleju BV-2 przez 72 godziny stężeniem 0,2 miligrama na mililitr czterech różnych beta-glukanów wyizolowanych z P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum i H. erinaceus. Po 72 godzinach zebrać supernatant za pomocą pipety i przepuścić pozostałą objętość przez filtr strzykawkowy o średnicy 0,20 mikrometra. Następnie zamrozić supernatant w temperaturze -80 stopni Celsjusza na co najmniej 24 godziny. Aby potraktować GL261 wstępnie aktywowaną pożywką kondycjonowaną mikroglejem, dodaj 250 mikrolitrów pożywki mikroglejowej poddanej działaniu beta-glukanu do 80% zbiegających się komórek GL261 przez 72 godziny.