JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 2:20 min. • July 8th, 2025
Zacznij od nerwowych komórek macierzystych wyhodowanych na szkiełku nakrywkowym pokrytym macierzą zewnątrzkomórkową w odpowiednim pożywce różnicowej.
Weź strzykawkę zawierającą zimną plazmę, która jest stanem skupienia zawierającym różne składniki reaktywne, w tym promieniowanie UV i naładowane cząstki.
Umieść dyszę strzykawki plazmowej na określonej wysokości nad hodowlą komórek nerwowych.
Uruchom strumień plazmy.
Osocze oddziałuje z nerwowymi komórkami macierzystymi, aktywując je.
Usuń starą pożywkę hodowlaną. Dodaj świeżą pożywkę hodowlaną i inkubuj.
Z biegiem czasu aktywowane nerwowe komórki macierzyste wytwarzają projekcje.
Wyrzuć pożywkę.
Pod mikroskopem światła z odwróconym kontrastem fazowym obecność wydłużonych wypustek na komórkach, przypominających te znajdujące się w komórce nerwowej, wskazuje na różnicowanie.
Aby leczyć plazmą nerwowe komórki macierzyste, ustaw odległość między dyszą strzykawki a pierwszym dołkiem komórek na 15 milimetrów. Zastąp supernatanty w hodowlach nerwowych komórek macierzystych 800 mikrolitrami świeżej pożywki różnicującej i umieść płytkę pod dyszami plazmy.
Upewnij się, że dysza strzykawki jest zamocowana nad środkiem każdej studzienki, utwórz trzy studzienki z plazmą przez 60 sekund na zabieg i trzy studzienki z 1% helem i tlenem przez 60 sekund na zabieg, pozostawiając trzy studzienki niepoddane działaniu jako kontrolne. Następnie zastąp supernatanty jednym mililitrem świeżej pożywki różnicującej i umieść komórki z powrotem w inkubatorze na sześć dni. Codziennie sprawdzaj stan różnicowania różnych grup pod mikroskopem światła z odwróconym kontrastem fazowym.
Po zabiegu pozwól komórkom w pełni zrównoważyć się w kondycjonowanej pożywce przez około godzinę przed zastąpieniem supernatantu świeżą pożywką różnicującą.