JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 2:18 min. • July 8th, 2025
Weźmy hodowlę indukowanych nerwowych komórek progenitorowych lub iNPC na wielodołkowej płytce pokrytej białkiem macierzy zewnątrzkomórkowej.
Zastąp pożywkę pożywką do indukcji glejowej i inkubuj. Czynniki wzrostu i hormony zawarte w pożywce ułatwiają różnicowanie iNPC w komórki prekursorowe gleju.
Zmieniaj pożywkę co drugi dzień w celu proliferacji komórek. Następnie zastąp pożywkę pożywką astrocytów i inkubuj.
Określone składniki odżywcze i czynniki wzrostu w pożywce napędzają różnicowanie komórek prekursorowych gleju w astrocyty.
Zmiana podłoża co drugi dzień sprzyja dojrzewaniu astrocytów.
Zmień pożywkę na pożywkę neuro-diff-pożywkę, gdy komórki są zlewające się w około 70% i kontynuuj zmianę pożywki co drugi dzień przez trzy tygodnie. Nie dziel komórek podczas różnicowania. Po trzech tygodniach komórki powinny wyrażać marker neuronalny TuJ1.
Aby uzyskać bardziej dojrzałe neurony i podtypy neuronów, kontynuuj różnicowanie do trzech miesięcy. W celu różnicowania iNPC specyficznie w kierunku linii glejowej, zmień pożywkę na pożywkę do indukcji glejowej, w tym 20 nanogramów na mililitr naskórkowego czynnika wzrostu, aby indukować różnicowanie w komórki prekursorowe gleju. Usuń połowę podłoża i zastępuj je świeżym podłożem co drugi dzień przez około dwa tygodnie.
W tym okresie komórki powinny być podzielone na 1 do 3 w obecności 10 mikromolowego inhibitora kinazy Rho po osiągnięciu 100% zbieżności. Po dwóch tygodniach zróżnicuj komórki dalej w astrocyty, zmieniając pożywkę na dostępną na rynku pożywkę astrocytów, gdy komórki są prawie zlewające się i kontynuując zmianę pożywki co drugi dzień. Około siedem dni później komórki zaczynają wyrażać markery astrocytów.