JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 2:01 min. • July 8th, 2025
Weź szalkę Petriego pokrytą polimerem.
Dodaj linię oligodendrocytów lub komórki OL do odpowiedniej pożywki hodowlanej i inkubuj.
Dodatni ładunek na powłoce polimerowej przyciąga ujemnie naładowaną błonę komórkową, zwiększając przyczepienie komórek do naczynia. Czynniki wzrostu i składniki odżywcze w pożywce ułatwiają ekspansję komórek.
Zastąp pożywkę podłożem ubogim w składniki odżywcze i inkubuj.
Niski poziom składników odżywczych wywołuje łagodny stres w komórkach, powodując wydzielanie białek, lipidów i innych cząsteczek, w tym czynników wzrostu i cytokin, do przestrzeni zewnątrzkomórkowej.
Zebrać pożywkę do probówki.
Filtruj pożywkę, sterylizuj pożywkę, aby usunąć zanieczyszczenia komórkowe i nierozpuszczalne składniki.
Przesącz zawierający rozpuszczalne cząsteczki bioaktywne wydzielane przez komórki OL nazywany jest pożywką kondycjonowaną oligodendrocytami lub OCM.
Przechowuj OCM w niższych temperaturach do czasu dalszego użycia, aby zapobiec degradacji białek i innych cząsteczek, zachowując w ten sposób skuteczność OCM.
Płytkę z dwiema lub trzema wstępnie pokrytymi 100-milimetrowymi szalkami Petriego z 10 mililitrami zawiesiny komórek.
Inkubować w wilgotnym inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza poniżej 5% dwutlenku węgla.
W okapie z przepływem laminarnym w sterylnych warunkach odnów pożywkę hodowlaną za pomocą 10 mililitrów ciepłej niskiej pożywki Mbb 27.
Inkubować przez 2 dni w wilgotnym inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza poniżej 5% dwutlenku węgla.
Aby zebrać OCM, należy zebrać supernatant zawierający czynniki wydzielane przez oligodendrocyty. Wysterylizuj OCM za pomocą filtra 0,22 mikrona.