JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 4:13 min. • July 8th, 2025
Ustaw mózg myszy grzbietową stroną do góry.
Pod mikroskopem oddziel półkule mózgowe. Odciągnij korę, a następnie hipokamp, aby odsłonić komory boczne i trzecią komorę.
Zbierz dwa boczne sploty naczyniówkowe. Są to struktury mózgu bogate w komórki odpornościowe, które wyściełają boczne komory jak długa zasłona.
Zbierz splot naczyniówkowy trzeciej komory, który jest krótką strukturą o ziarnistej powierzchni.
Odłącz móżdżek, aby odsłonić czwartą komorę.
Zbierz splot naczyniówkowy czwartej komory, który jest długą kulistą strukturą o ziarnistej powierzchni.
Umieść wszystkie sploty naczyniówkowe w probówce z buforowaną solą fizjologiczną, aby zachować integralność tkanek.
Dodaj roztwór enzymu trawiennego i inkubuj z mieszaniem.
Enzym rozkłada macierz zewnątrzkomórkową i rozluźnia komórki.
Dodać odpowiedni bufor, aby dezaktywować enzym.
Odwirować, aby osadzić komórki. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w nowym buforze do dalszej analizy.
Na początek umieść mózg wypreparowany grzbietową stroną grzbietową myszy C57 Black 6 do góry na szalce Petriego i umieść szalkę poniżej celów lup lornetkowych. Utrzymując mózg na miejscu za pomocą kleszczy, włóż dwa końce innej pary kleszczy w dół przez linię środkową między półkulami.
Za pomocą kleszczy odciągnij korę z modzelem i hipokampem od przegrody, odsłaniając komorę boczną i część trzeciej komory. Zidentyfikuj boczny splot naczyniówkowy jako długą zasłonę wyściełającą komorę boczną i rozszerzającą się na obu końcach. Następnie za pomocą dwóch końców cienkich kleszczy zbierz boczny splot naczyniówkowy. Uważaj, aby zebrać trójkątną tylną część ukrytą przez tylny fałd hipokampa.
Następnie odciągnij korę z ciałem modzelowatym i hipokampem przeciwległej półkuli od przegrody, aby odsłonić całą trzecią komorę i przeciwległą komorę boczną. Za pomocą cienkich kleszczyków zbierz trzeci splot naczyniówkowy zidentyfikowany jako krótka struktura o ziarnistym wyglądzie powierzchni. Następnie zbierz drugi boczny splot naczyniówkowy.
Następnie włóż dwa końce kleszczy między móżdżek a śródmózgowie i odłącz móżdżek od mostu i rdzenia, aby odsłonić czwartą komorę. Następnie zidentyfikuj czwarty splot naczyniówkowy jako długą, kulistą strukturę o ziarnistym aspekcie powierzchni, która wyściela czwartą komorę od bocznego prawego końca do lewego końca między móżdżkiem a rdzeniem. Za pomocą cienkich kleszczy zbierz czwarty splot naczyniówkowy.
Po inkubacji wszystkich zebranych splotów naczyniówkowych z kolagenazą dożylną, delikatnie pipetuj w górę iw dół około 10 razy, aby sfinalizować dysocjację. Następnie napełnij probówkę do 1,5 mililitra buforem MACS, aby zatrzymać aktywność kolagenazy dożylnej. Następnie odwirować komórki i wyrzucić supernatant przed umyciem komórek 1,5 mililitra buforu MACS. Po dodaniu odpowiednich kulek kompensacyjnych i roztworów przeciwciał próbki należy inkubować na lodzie przez 30 do 45 minut, chroniąc je przed ekspozycją na światło. Następnie napełnij probówki 1,5 mililitra buforu MACS.