JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 2:37 min. • April 28th, 2025
Zacznij od grubej części mózgu, która została wybarwiona roztworem Golgiego-Coxa w celu selektywnego przyciemnienia neuronów i wybarwiona fioletem krezylowym, aby podkreślić obszar mózgu.
Umieść je na szkiełku, które zostało wstępnie potraktowane środkiem czyszczącym w celu zwiększenia przezroczystości tkanki.
Olej silikonowy odpowiada współczynnikowi załamania światła soczewki obiektywu i szkiełka, umożliwiając szczegółowe obrazowanie.
Skoncentruj się na próbce, a następnie dostosuj ekspozycję i balans bieli kamery, aby uzyskać optymalną jakość obrazu.
Skup się na górnej warstwie, aby ustawić górną granicę, a następnie na dolnej warstwie, aby ustawić dolną granicę.
Dostosuj odstępy między obrazami z wystarczającym nakładaniem się, aby uchwycić szczegóły projekcji neuronalnych.
Powtórz obrazowanie w różnych miejscach, aby uchwycić obszary zainteresowania, a następnie nałóż te obrazy, aby stworzyć trójwymiarową reprezentację neuronów.
Aby uchwycić stosy obrazów o wysokiej rozdzielczości obszaru zawierającego interesujący nas neuron, najpierw wybierz na mikroskopie obiektyw zanurzeniowy z olejkiem silikonowym 30x 1,05 NA. Następnie nałóż 3 do 4 kropli silikonowego olejku immersyjnego na szkiełko. Umieść obiektyw na szkiełku, zapewniając kontakt między obiektywem a olejem. Ustaw ostrość obrazu i dostosuj ustawienia aparatu, w tym ekspozycję i balans bieli w oprogramowaniu do przetwarzania obrazu. Następnie ustaw górną i dolną granicę stosu obrazów, skupiając się na górze sekcji, a następnie wybierając pozycję Ustaw obok górnej części stosu w oknie pozyskiwania obrazu.
Następnie skup się na dole sekcji i wybierz Ustaw obok dołu stosu. Ustaw odległość kroku na 1 mikron, wprowadzając 1 mikron obok odległości między obrazami w oknie akwizycji obrazu. Na koniec przechwyć stos obrazów, wybierając opcję Pobierz stos obrazów w oknie akwizycji obrazu. Powtórz poprzednie kroki, aby uchwycić cały obszar zainteresowania, upewniając się, że wszystkie stosy obrazów nakładają się na siebie o co najmniej 10% w osiach x i y.