Obrazowanie wapnia w czasie rzeczywistym przyśrodkowej kory przedczołowej myszy za pomocą miniskopu

Weźmy znieczuloną, transdukowaną mysz, której wszczepiono soczewkę o indeksie gradientu skierowaną do przyśrodkowej kory przedczołowej, gdzie neurony wyrażają genetycznie zakodowane wskaźniki wapnia.

Zdejmij pokrywę obiektywu i oczyść jej powierzchnię, aby zapewnić czystą przepuszczalność światła.

Przymocuj miniskop do uchwytu obiektywu.

Dostosuj pozycję miniskopu, aby określić optymalną płaszczyznę ogniskowej. Ta regulacja zapewnia wyraźną wizualizację ciał komórek neuronalnych.

Odłącz i poczekaj, aż mysz odzyska sprawność.

Podłącz do miniskopu i przenieś mysz do komory z konfiguracją nagrywania behawioralnego.

Podczas obrazowania miniskop emituje światło, aby wzbudzić wskaźniki wapnia, które fluoryzują po wewnątrzkomórkowym napływie wapnia.

Soczewka o indeksie gradientu przekazuje te sygnały optyczne z głębokich tkanek mózgowych do miniskopu, zmniejszając rozpraszanie światła i umożliwiając wizualizację aktywności neuronalnej w czasie rzeczywistym.

Przetwarzaj zarejestrowaną przejściową aktywność wapnia z obserwacjami behawioralnymi, aby skorelować aktywność neuronów z określonymi zachowaniami.

Po krótkim znieczuleniu myszy izofluranem, przed zdjęciem nasadki ochronnej poluzuj blokującą w podstawie za pomocą małego śrubokręta i wyczyść powierzchnię soczewki GRIN wacikiem nasączonym acetonem. Podłącz miniskop do i uruchom oprogramowanie NewView, aby rozpocząć identyfikację najlepszej płaszczyzny ogniskowej z dostosowaniem położenia miniskopu względem podstawy poprzez lekkie dokręcenie lub poluzowanie za pomocą kleszczy. Po określeniu najlepszej płaszczyzny ogniskowej dokręć blokującą przed odłączeniem i umieszczeniem myszy z powrotem w klatce domowej.

Włącz oprogramowanie kamery behawioralnej, aby wyświetlić arenę zachowania myszy za pomocą funkcji transmisji na żywo. Ręcznie dostosuj ostrość górnego aparatu. Wybierz Trigger Strobe i zaznacz Włącz/wyłącz spust, a następnie kliknij przycisk Nagraj. Następnie użyj przeglądaj, aby wybrać lokalizację, w której zostaną zapisane nagrania zachowań. Wybierz żądany format obrazu.

Zbliż mysz do areny i podłącz miniskop do podłączonego do systemu akwizycji danych. Następnie umieść mysz na środku areny. W oprogramowaniu kamery behawioralnej kliknij przycisk Rozpocznij nagrywanie.

W NewView sprawdź LED1, kliknij Przechwyć, a następnie uruchom przyciski, aby rozpocząć nagrywanie. Pozwala to na jednoczesne rejestrowanie obrazowania wapnia i zachowania myszy. Naciśnij Stop po 3,000 klatek i zapisz pliki.