JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuroscience
0 wyświetleń • 2:29 min. • August 7th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz z żyłką włożoną do środkowej tętnicy mózgowej w celu wywołania okluzji.
Blokuje to przepływ krwi do mózgu, wywołując ogniskowe niedokrwienie.
Okluzja ogranicza dopływ tlenu i glukozy, powodując wyczerpanie ATP i depolaryzację neuronów.
Zdepolaryzowane neurony uwalniają nadmiar glutaminianu, który wiąże się z receptorami postsynaptycznymi, powodując ogromny napływ wapnia.
Podwyższony poziom wapnia wewnątrzkomórkowego zaburza funkcję mitochondriów i wspomaga produkcję ROS, inicjując uszkodzenie neuronów.
Ponownie znieczul mysz.
Ponownie otwórz nacięcie i usuń monofilament, aby uzyskać reperfuzję.
Nagłe ponowne wprowadzenie tlenu generuje nadmiar ROS z dysfunkcyjnych mitochondriów, pogarszając uszkodzenie neuronów.
Aby temu zapobiec, po rozpoczęciu reperfuzji wystawiaj mysz na działanie mieszaniny gazowej o wysokiej zawartości dwutlenku węgla w celu kwaśnego kondycjonowania końcowego lub APC.
Zwiększa to stężenie protonów w mózgu, hamując receptory, zmniejszając napływ wapnia i zapobiegając ekscytotoksyczności za pośrednictwem wapnia.
Dodatkowo APC stabilizuje mitochondria i hamuje produkcję ROS, zapewniając w ten sposób neuroprotekcję.
55 minut po rozpoczęciu okluzji należy ponownie znieczulić zwierzę izofluranem i ustawić zwierzę jak poprzednio. Następnie otwórz nacięcie szyi i ponownie odsłonij tętnicę szyjną wspólną. Po okresie okluzji użyj kleszczyków okulistycznych, aby delikatnie wyciągnąć włókno, aby uzyskać reperfuzję. Następnie zamień szew tymczasowy w stały, zaciskając węzeł. W celu leczenia kwasicy zmień gaz wdychany przez stożek nosowy na 20% dwutlenku węgla, 20% tlenu i 60% azotu przez pięć minut. Po zamknięciu nacięcia przerwanym szwem chirurgicznym umieść mysz w klatce ogrzewanej o temperaturze 30 stopni Celsjusza, aż mysz odzyska przytomność.