Um método visual sensível para a detecção de bactérias produtoras de sulfeto de hidrogênio

Comece com uma placa contendo uma suspensão de várias bactérias produtoras de sulfeto de hidrogênio capazes de metabolizar compostos ricos em enxofre.

Adicione uma solução de cloreto de bismuto que contenha L-cisteína como fonte de enxofre e incube brevemente a mistura.

Durante a incubação, as bactérias utilizam L-cisteína e produzem sulfeto de hidrogênio, que reage com íons de bismuto para formar um precipitado de sulfeto de bismuto preto insolúvel.

Essa reação muda a cor da solução de amarelo claro para preto, indicando produção de sulfeto de hidrogênio.

Em seguida, execute o ensaio usando concentrações variadas de hidrossulfeto de sódio como padrão de sulfeto de hidrogênio e adicione cloreto de bismuto.

Isso gera um gradiente de cor que varia de preto claro a intenso, representando os níveis de sulfeto de hidrogênio.

Agora, use esse gradiente para comparar e estimar visualmente os níveis de sulfeto de hidrogênio nas amostras bacterianas, permitindo a detecção rápida de bactérias produtoras de sulfeto de hidrogênio.

Misture 100 microlitros de cultura bacteriana com 100 microlitros de solução de bismuto recém-preparada nas placas de microtitulação de 96 poços e cultive por 20 minutos a 37 graus Celsius. Para cada cepa bacteriana, realizar a análise em triplicata.

Após 20 minutos, verifique se há mudança de cor. Se a cor da solução mudar de amarelo claro para preto, isso indica que a bactéria é capaz de produzir sulfeto de hidrogênio ou H2S. Repita esta medição três vezes.

Determinar a sensibilidade do método utilizando diferentes concentrações de hidrossulfureto de sódio misturado com solução de sulfureto de bismuto. Finalmente, determine a presença de íons bissulfeto e sulfeto observando a formação de um precipitado de sulfeto de bismuto preto. Pontue a cor dos poços usando uma escala visual de nenhuma produção de cor até a produção de cor preta mais escura.