Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiology
0 visualizações • 2:14 min. • September 26th, 2025
Comece com uma cepa bacteriana bioluminescente marinha carregando o operon de luminescência, que codifica a luciferase e as enzimas necessárias para a síntese do substrato.
Listre a tensão em uma placa de ágar rica em nutrientes suplementada com água do mar artificial para imitar a salinidade nativa e apoiar o crescimento.
Incubar para obter colônias discretas e, em seguida, isolar e inocular uma única colônia em meio líquido contendo água do mar artificial.
Incubar com agitação para promover o crescimento durante a noite na fase exponencial.
Transfira um volume definido da cultura durante a noite para um meio fresco e incube-o para aumentar a densidade bacteriana.
À medida que a população se expande, as bactérias liberam autoindutores, sinalizando moléculas que se acumulam e se difundem nas células, onde se ligam a receptores intracelulares, ativando o operon de luminescência.
Essa ativação induz a expressão da luciferase e a biossíntese do substrato.
A luciferase catalisa a oxidação do substrato, emitindo luz azul-esverdeada.
Monitore a cultura para bioluminescência como um indicador de ativação do operon de luminescência e emissão de luz em bactérias marinhas.
Depois de preparar o meio de acordo com o protocolo de texto, listre as cepas bioluminescentes bacterianas em placas de ágar médio de água do mar artificial e incuba-as a 24 a 30 graus Celsius durante a noite.
Prepare uma cultura durante a noite inoculando 100 mililitros de meio artificial de água do mar com uma única colônia da placa. Em seguida, incube a cultura a 24 a 30 graus Celsius e 120 RPM durante a noite. No dia seguinte, inocule 800 mililitros de meio artificial de água do mar com 8 mililitros de cultura durante a noite.
Incube as células bacterianas a 24 a 30 graus Celsius e 120 RPM e observe as células até que comecem a brilhar.