Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiology
0 visualizações • 2:47 min. • October 30th, 2025
Comece com um rato experimental pré-tratado com bactérias benéficas e um rato de controle administrado com solução salina tamponada com fosfato ou PBS.
Exponha os dois ratos a altas temperaturas para induzir estresse fisiológico.
No rato de controle, o estresse térmico interrompe a barreira epitelial intestinal, permitindo que bactérias derivadas do intestino se transloquem e se espalhem para os órgãos internos.
No entanto, em ratos experimentais, bactérias benéficas liberam moléculas de sinalização que preservam as junções epiteliais e reduzem a translocação bacteriana.
Pegue tubos contendo as amostras de fígado colhidas de cada rato.
Adicione PBS e homogeneize as amostras para liberar bactérias no tampão.
Espalhe o homogenato diluído em placas de ágar ricas em nutrientes.
Incube as placas para permitir a formação de colônias bacterianas. Em seguida, conte as colônias.
Contagens de colônias mais altas na amostra de controle indicam ruptura da barreira intestinal e translocação bacteriana.
Em contraste, menos colônias na amostra experimental indicam o efeito de bactérias benéficas na limitação da translocação bacteriana para o intestino.
Depois de tratar ratos por gavagem oral com B. subtilis BSB3 ou PBS por dois dias, depois subdividir os animais e medir sua temperatura, manter os ratos dos grupos um e dois em temperatura ambiente por 25 minutos. Colocar os animais dos grupos três e quatro em uma câmara climática a 45 graus Celsius e 55% de umidade relativa por 25 minutos.
Então, após a eutanásia dos animais, coleta do sangue do tronco e isolamento dos órgãos de acordo com o protocolo de texto, adicione PBS estéril a cada tubo para obter uma diluição de um a dez pesos por volume da amostra e use um homogeneizador de tecido de vidro estéril para gerar suspensões de tecido homogêneo.
Em seguida, use PBS estéril para fazer diluições em série de cada amostra. Em seguida, coloque 0,1 mililitros de todas as diluições na superfície do ágar MacConkey e 5% de sangue e ágar sangue Brucella com hemina e vitamina K1. Depois de incubar as placas, use um contador de colônias para contar as colônias em cada grupo de placas.