Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiology
0 visualizações • 2:18 min. • January 30th, 2026
Comece com embriões anestesiados, transparentes e transgênicos de peixe-zebra que expressam macrófagos marcados fluorescente.
Os embriões são pré-injetados no músculo caudal com a cepa áspera marcada por Mycobacterium abscessus marcada fluorescentemente para induzir uma infecção localizada.
A ausência de glicopeptidolípidos de superfície nessas bactérias promove sua agregação.
Imobilize os embriões em agarose de baixo ponto de fusão e oriente-os para expor o local da infecção.
Quando a agarose solidificar, adicione água para peixes contendo um agente anestésico para manter a anestesia e evitar a desidratação.
Monitore a infecção em tempo real por meio de microscopia de fluorescência.
Após a infecção, os macrófagos endógenos migram em direção às bactérias e fagocitam células individuais.
No entanto, algumas bactérias formam cordões — agregados extracelulares alongados que se replicam, se espalham e resistem à fagocitose, causando morte da célula hospedeira e infiltração imunológica.
Apesar disso, as células imunes falham em eliminar os cordões, permitindo que bactérias e células mortas do hospedeiro se acumulem e formem um abscesso.
Isso revela cording como um M-chave. Estratégia de evasão imune para abscessos .
Para imagens ao vivo da infecção por M. abscessus , monte embriões anestesiados com tricaine em agarose de 1% de ponto de fusão baixo em uma placa de Petri de 35 milímetros com fundo de vidro para microscópio invertido ou em uma lâmina de depressão de cavidade única para microscopia confocal vertical. Oriente o embrião para a posição desejada e cubra a agarose solidificada com água de peixe contendo tricaína. Por fim, utilize um microscópio de fluorescência com objetiva 10X ou um microscópio confocal de fluorescência com objetivos 40X ou 63X para aquisição e transmissão sequencial de fluorescência do embrião.