Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Immunology
0 visualizações • 2:25 min. • July 8th, 2025
Pegue uma lâmina de câmara de vários poços contendo monocamadas de microglia.
No poço de teste, cubra as células com β-glucano. O poço de controle carece de β-glucano. Incubar.
No poço de teste, os β-glucanos, padrões moleculares associados a patógenos, ligam-se a receptores específicos na microglia, causando fagocitose de β-glucano.
Isso ativa a microglia, produzindo e liberando moléculas bioativas, como oxidantes reativos e citocinas, no meio.
Colete os meios contendo moléculas bioativas dos poços e filtre-os para remover detritos e β-glucano.
Congele o meio em baixas temperaturas para preservar a atividade biológica das moléculas bioativas.
Em seguida, descongele e adicione a mídia a uma lâmina de câmara de vários poços contendo monocamadas de células cancerígenas cerebrais. Incubar.
As moléculas bioativas desencadeiam vias de sinalização celular, reduzindo a proliferação de células cancerígenas e induzindo a apoptose.
A redução da proliferação de células cancerígenas e o aumento da apoptose sugerem β-glucanos como agentes que promovem propriedades antitumorais da microglia contra células cancerígenas cerebrais.
Ative a microglia revestindo as células microgliais BV-2 por 72 horas com concentração de 0,2 miligramas por mililitro de quatro beta-glucanos diferentes isolados de P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum e H. erinaceus. Após 72 horas, recolher o sobrenadante com uma pipeta e passar o volume restante através de um filtro de seringa de 0,20 micrómetros. Em seguida, congele o sobrenadante a -80 graus Celsius por pelo menos 24 horas. Para tratar o GL261 com o meio pré-ativado condicionado pela microglia, adicione 250 microlitros de meio microglial tratado com beta-glucano a 80% de células GL261 confluentes por 72 horas.