Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neuroscience
0 visualizações • 2:39 min. • July 8th, 2025
Tome uma suspensão de neurônios do hipocampo do embrião de rato.
Transfira os neurônios para a área ativa revestida com fator de adesão de uma matriz de microeletrodos, ou MEA. Esta área ativa é confinada por uma estrutura polimérica.
Incube o MEA. Os neurônios aderem à área ativa MEA revestida, formando uma rede neuronal 2D.
Além disso, transfira os neurônios para uma monocamada de microesferas de vidro revestida com fator de adesão em inserções de membrana dentro de uma placa de vários poços.
Incube para que os neurônios se liguem às esferas revestidas com fator de adesão.
Transfira as microesferas com neurônios aderentes para a área MEA confinada que contém a rede neuronal.
As microesferas se auto-montam para formar uma estrutura hexagonal.
Repita a transferência de microesferas no MEA várias vezes, construindo camadas que se auto-montam, formando uma estrutura 3D compactada.
Adicione mídia à área ativa confinada do MEA e incuba.
Os neurônios crescem, formando uma rede neuronal 3D interconectada.
Coloque as células a uma densidade de 2.000 células por milímetro quadrado na área ativa do MEA, definida pela restrição PDMS para criar uma rede neuronal 2D. Em seguida, coloque o dispositivo MEA na incubadora com 5% de atmosfera de dióxido de carbono umidificado a 37 graus Celsius.
Para concluir a etapa preliminar para a construção da cultura 3D, distribua 160 microlitros da suspensão com uma concentração de células de 600 a 700 células por microlitro na superfície da monocamada de microesferas posicionada dentro das placas multipoços. Em seguida, coloque as placas multipoços na incubadora com 5% de atmosfera de dióxido de carbono umidificado a 37 graus Celsius.
Seis a oito horas após o plaqueamento, transferir 30 a 40 microlitros da suspensão com microesferas e neurônios para a área do MEA delimitada pela restrição PDMS. Após cada transferência, espere cerca de meio minuto para permitir que as microesferas se auto-montem em uma estrutura compacta hexagonal. Uma vez que todas as camadas estejam depositadas e montadas espontaneamente, adicione 300 microlitros de meio no topo da área delimitada pela restrição PDMS.
Coloque a estrutura 3D acoplada ao MEA na incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 48 horas.