Desenvolvendo bolas de neurônios usando uma técnica de cultura de gota suspensa

Comece com uma suspensão unicelular de células progenitoras neuronais embrionárias de camundongo em um meio neurobasal.

O meio contém nutrientes essenciais para manter a viabilidade celular.

Dispense pequenas gotas desta suspensão celular na tampa de uma placa de cultura não adesiva, garantindo que fiquem espaçadas.

Inverta a tampa, resultando na formação de gotas pendentes.

Posicione a tampa acima do prato contendo um tampão para estabelecer um ambiente úmido que evite a evaporação do meio e incube.

Dentro das gotas suspensas, a tensão superficial do líquido mantém a forma da gota.

Este confinamento de forma restringe as células a um espaço limitado sem se espalhar.

Além disso, as forças gravitacionais dentro das gotas direcionam as células para a região inferior.

À medida que as células progenitoras neuronais entram em contato mais próximo, elas se agregam espontaneamente para formar uma estrutura tridimensional conhecida como bola de neurônios.

Para preparar bolas de neurônios, ajuste a densidade celular nesta suspensão celular para 1 milhão de células por mililitro usando o meio NGB. Adicione 7 mililitros de PBS à parte inferior das placas de cultura. Cultive os neurônios corticais como gotas suspensas de 10 microlitros contendo 10.000 células por gota dentro das pálpebras superiores de placas de cultura de 10 centímetros. Mantenha os pratos em uma incubadora por três dias a 37 graus Celsius com 5% de CO₂ em condições umidificadas para permitir a formação de bolas de neurônios.