Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neuroscience
0 visualizações • 2:26 min. • July 8th, 2025
Pegue os neurônios induzidos por humanos, ou iNs, cultivados em uma matriz extracelular.
Remova o meio e adicione enzimas digestivas que rompem a matriz, dissociando as células.
Transfira os iNs para um tubo. Centrifugar a suspensão e rejeitar o sobrenadante que contém as enzimas.
Ressuspenda os iNs em um meio de co-cultura; transfira-os para uma cultura de células precursoras de oligodendrócitos induzidas, ou iOPCs.
As iOPCs são precursoras dos oligodendrócitos que formam bainhas de mielina ao redor dos axônios dos neurônios.
Após a incubação, os iOPCs formam conexões sinápticas com os iNs. Fatores tróficos liberados pelos iOPCs e fatores de crescimento no meio promovem a maturação iN em neurônios, exibindo processos celulares aumentados que formam conexões sinápticas com outros neurônios.
A atividade elétrica dos neurônios maduros e fatores de crescimento no meio induz a maturação do iOPC em oligodendrócitos.
Os oligodendrócitos estendem os processos celulares, formando bainhas de mielina ao redor dos axônios neuronais.
A co-cultura estabelecida está pronta para análise.
No dia 14, placa iOPCs a uma densidade de 1 x 105 células por poço em uma placa de 24 poços em meio de diferenciação OPC. No dia seguinte, desconecte os neurônios humanos induzidos com solução de descolamento celular. Adicione neurônios aos OPCs cultivados, plaqueando na densidade de assentos de 2 x 105 células por poço. Use meio de co-cultura contendo meio A neurobasal, suplemento de B-27 a 2% e 100 nanogramas por mililitro de triiodotironina T3. Mude o meio no dia seguinte e depois em dias alternados. Se os OPCs proliferarem muito rápido e atingirem a confluência em menos de três dias, adicione 2 a 5 micromolares Ara-C.