Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neuroscience
0 visualizações • 2:08 min. • July 8th, 2025
Em uma placa de cultura, cubra uma lamínula com poliornitina, um polímero carregado positivamente, e incuba.
A poliornitina forma uma camada semelhante a uma malha que ajuda as células carregadas negativamente a aderirem à lamínula.
Remova a solução e lave as lamínulas com uma solução salina tamponada para remover a poliornitina não ligada.
Adicione uma solução contendo uma proteína da matriz extracelular chamada laminina e incuba.
A laminina forma uma matriz sobre a lamínula revestida com poliornitina, aumentando a fixação celular.
Descarte a solução e pegue um pequeno número de células-tronco neurais suspensas em um meio livre de fator de crescimento.
Adicione esta cultura de baixa densidade sobre a lamínula preparada em um movimento de rotação lenta para distribuir uniformemente as células.
Inicialmente, a privação do fator de crescimento promove a divisão celular.
Com o tempo, as células-tronco se diferenciam em neurônios com longas projeções
Eventualmente, os neurônios produzem estruturas semelhantes à coluna vertebral sobre suas projeções, como os neurônios piramidais corticais.
Para preparar culturas neuronais, coloque lamínulas de vidro em placas de cultura de seis poços e adicione poliornitina. Incube durante a noite sob uma coifa de fluxo. No dia seguinte, use DPBS para lavar as lamínulas três vezes e adicione laminina. Incubar sob uma capela de fluxo durante pelo menos 10 horas.
Preparar o meio de cultura que contenha os seguintes componentes. Em seguida, use o meio para plaquear e despachar células-tronco neurais ou NSCs a uma densidade de 50.000 células por centímetro quadrado, pipetando com movimentos lentos de rotação para reduzir o agrupamento de células.