Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neuroscience
0 visualizações • 2:18 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo células-tronco pluripotentes humanas aderidas com capacidade de diferenciação de várias linhagens.
Introduzir um meio de células estaminais contendo dimetilsulfóxido ou DMSO.
O DMSO entra nas células e impede a progressão do ciclo celular da fase Gap 1, ou G1, um estágio inicial do ciclo celular, para a síntese, ou fase S.
Isso cria uma população uniforme de células na fase G1, aumentando sua capacidade de diferenciação.
Substitua o meio por um meio de diferenciação ectodérmica rico em nutrientes contendo inibidores das vias de sinalização BMP e TGF-β.
Esses inibidores se ligam a receptores ALK específicos nas células-tronco, bloqueando as vias de sinalização BMP e TGF-β e impedindo sua diferenciação em precursores de endoderme e mesoderma.
Isso permite a diferenciação seletiva de células-tronco presas por G1 em precursores ectodérmicos que possuem capacidade de diferenciação neural.
Substitua regularmente o meio por um meio fresco para manter os níveis de nutrientes e fatores de diferenciação, garantindo a sobrevivência celular.
Pré-trate as células com DMSO conforme descrito para culturas 2D e prepare Noggin e SP431542 soluções estoque. Prepare reposição de soro knockout a 10% suficiente ou KOSR em DMEM knockout por três a quatro dias de troca de meio. Prepare os meios de diferenciação ectodérmica adicionando Noggin e SP431542 ao DMEM nocaute KOSR pré-aquecido, conforme descrito no manuscrito.
Após o pré-tratamento com DMSO, aspire o meio das células e adicione 2 mililitros de meio de diferenciação a cada poço. Deixe as células incubarem por três a quatro dias a 37 graus Celsius em uma incubadora de dióxido de carbono, substituindo o meio diariamente por novos fatores de diferenciação.