Geração de fatias do córtex cingulado anterior do tálamo medial a partir de cérebros de camundongos

Comece com uma cabeça de rato decepada. Remova a pele para expor o crânio e abra o crânio para acessar o cérebro.

Remova os bulbos olfativos e corte todas as conexões nervosas para extrair o cérebro para o líquido cefalorraquidiano artificial oxigenado gelado, ou aCSF.

Pegue o cérebro e faça dois cortes verticais em cada metade para expor a anatomia interna.

Faça dois cortes angulares para isolar a região que contém o córtex cingulado anterior do tálamo medial ou a via MT-ACC. O MT, uma parte do tálamo, atua como uma estação de retransmissão por meio de projeções neuronais que se estendem ao ACC no córtex frontal.

Fixe o cérebro em uma placa angular usando um adesivo, faça um corte para desdobrar o cérebro e expor o caminho e, em seguida, prenda-o a um estágio de amostra de vibrato.

Coloque o stage no vibratome, adicione um buffer e gere fatias contendo a via MT-ACC.

Mantenha as fatias do cérebro em um fluxo contínuo de aCSF oxigenado para manter sua viabilidade.

Exponha o crânio do animal e corte o músculo restante. Em seguida, retire a superfície dorsal do crânio usando rongeurs e apare as laterais. Posteriormente, usando uma espátula, corte os bulbos olfatórios e as conexões nervosas ao longo da superfície ventral do cérebro antes de removê-lo.

Transfira rapidamente o cérebro para um béquer cheio de ACSF oxigenado gelado. Para preparar fatias contendo a via MT-ACC, faça um corte sagital 2 milímetros laterais à linha média em cada hemisfério para exibir a anatomia subcortical.

Em seguida, faça um corte transversal angular paralelo ao trato de fibras visível no estriado. Faça o segundo corte transversal angular da conexão entre o cerebelo e o córtex visual, até o ponto médio entre a comissura anterior e o trato óptico que são ventrais e paralelos ao caminho cingulado do tálamo. Depois disso, prenda o bloco cerebral a uma placa angular com um adesivo de cianoacrilato.

Faça um corte logo acima do ponto de inflexão do caminho. Depois disso, desdobre a placa, alise-a e cole-a no estágio da câmara de um vibratome. Posteriormente, corte as fatias de cérebro com 500 micrômetros de espessura e mantenha-as em ACSF oxigenado gelado. Transferir uma fatia para a câmara de registo a 32 graus Celsius com perfusão contínua de ACSF oxigenado durante uma hora.