Transplante de células precursoras de interneurônios derivados de humanos no hipocampo de filhotes de camundongos

Prenda um filhote de camundongo geneticamente modificado anestesiado em uma estrutura estereotáxica usando barras de orelha na direção oposta para evitar ferimentos.

O hipocampo do filhote reduziu os interneurônios inibitórios, levando à hiperexcitação dos neurônios excitatórios.

Mantenha a cabeça chata e cubra o filhote com gelo para prolongar a anestesia.

Desinfete o crânio e identifique a sutura lambda como ponto de referência.

Posicione a agulha de injeção nas coordenadas do hipocampo alvo.

Usando uma agulha dobrada, crie um orifício de microentrada, minimizando os danos ao crânio.

Abaixe a agulha até a profundidade alvo e injete células precursoras de interneurônios derivadas de humanos a uma taxa controlada, minimizando os danos aos tecidos.

Retraia lentamente a agulha para evitar o refluxo celular.

Remova o filhote da estrutura, aqueça-o até que o movimento seja retomado e, em seguida, devolva-o à cama na gaiola

.

As células precursoras injetadas se dispersam pelo hipocampo, amadurecem e se integram à rede neuronal. Com o tempo, eles aumentam a transmissão inibitória, o que restaura o equilíbrio excitatório-inibitório.

Posicione o filhote colocando-o na estrutura estereotáxica e usando as barras auriculares na direção oposta. Em seguida, limpe a superfície da pele usando um tecido mole embebido em etanol. Identifique lambda e defina as coordenadas como 0 no console de exibição digital do instrumento estereotáxico.

Depois de realocar a seringa Hamilton para as coordenadas desejadas, use uma agulha de insulina dobrada a 90 graus para penetrar no crânio, criando um pequeno orifício. Em seguida, traga a seringa de Hamilton para baixo até que a agulha cruze o crânio e 0 a coordenada dorsoventral.

Abaixe a agulha até que as coordenadas dorsoventrais desejadas sejam alcançadas. Retraia a agulha lentamente assim que as células-tronco forem injetadas. Termine o procedimento aquecendo o filhote com as mãos até que ele comece a se mover antes de devolvê-lo à mãe.