Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neuroscience
0 visualizações • 2:53 min. • August 7th, 2025
Comece com um prato contendo uma micro-coluna. A micro-coluna tem um invólucro externo de hidrogel e uma matriz extracelular, ou núcleo ECM.
Adicione gotas de meio de cultura ao mesmo prato.
Transfira os agregados de células neuronais para o prato e coloque-os em uma das gotículas médias.
Observar ao microscópio estereoscópico e inserir agregados celulares em ambas as extremidades da microcoluna.
Em seguida, transfira a micro-coluna semeada para o meio para viabilidade celular.
Incubar para permitir a ligação da célula ao ECM.
Usando o estereomicroscópio, confirme a fixação da célula. Em seguida, adicione meio de cultura para cobrir o prato e incube.
Os neurônios ligados começam a estender seus axônios através da MEC.
Substitua regularmente o meio médio por um meio fresco para manter os níveis de nutrientes.
Com o tempo, os axônios crescem e abrangem todo o comprimento da microcoluna, formando redes neurais.
A rede neural desenvolvida com engenharia de microtecidos está pronta para reconstruir os circuitos neurais danificados.
Prossiga para a semeadura de células imediatamente após a incubação. Transfira aproximadamente 10 a 20 microlitros de meio de cultura para duas áreas livres nas placas de Petri que contêm as microcolunas. Use uma micropipeta para coletar os agregados neuronais individualmente e transfira-os para a placa de Petri que contém as construções. Mova os agregados com uma pinça para um dos pequenos pools de meio de cultura para preservar a saúde das células.
Enquanto observa sob um estereomicroscópio, use uma pinça para inserir um agregado em uma extremidade das microcolunas para micro-TENNs unidirecionais ou em cada extremidade para arquitetura bidirecional. Em seguida, mova a microcoluna semeada para o outro pequeno pool de meio de cultura para evitar a desidratação e preservar a saúde dos agregados. Quando todas as microcolunas estiverem carregadas, incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 45 minutos para permitir que os agregados adiram ao ECM.
Após a incubação, verificar se os agregados permanecem nas extremidades das microcolunas, utilizando o estereomicroscópio. Por último, inundar cuidadosamente as placas de Petri que contêm os micro-TENNs com meio de cultura com uma pipeta. Coloque os pratos em uma incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono para cultura a longo prazo.