Name: Usando Espalhamento Múltiplo de Luz para Examinar a Estabilidade de Extratos de Phyllanthus emblica L. Obtidos com Diferentes Métodos de Extração (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Aprenda a avaliar a estabilidade de extratos de Phyllanthus emblica L. usando espalhamento múltiplo de luz. Este método reduz o tempo de análise em 200 vezes e fornece parâmetros abrangentes para otimização de processos.

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Este estudo foi financiado por subsídios da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81973493); Equipe Nacional Interdisciplinar de Inovação da Medicina Tradicional Chinesa (ZYYCXTD-D-202209); Sanajon Pharmaceutical Group Chengdu University of TCM produção, estudo e Projeto de Laboratório Conjunto de Pesquisa (2019-YF04-00086-JH); e Projeto Financiado pelo Plano de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (2021YFN0100). Os autores agradecem ao Instituto Inovador de Medicina Chinesa e Farmácia da Universidade de Chengdu da MTC por seu apoio técnico no trabalho de espectrometria de massa.

1. Preparação do extrato
<ol><li>Pese com precisão uma quantidade adequada de PE e adicione 10x (peso) de água deionizada para extração de refluxo.</li>
	<li>Colocar cinco amostras para extração do refluxo por 0 h (E1), 0,5 h (E2), 1 h (E3), 1,5 h (E4) e 2 h (E5) após a pesagem.</li>
	<li>Após a extração, resfriar as amostras à temperatura ambiente e pesar para compensar o peso perdido para garantir a consistência com os pesos pré-extração.</li>
	<li>Centrifugar as amostras a 8.581 × g durante 10 min para garantir a remoção de material insolúvel e resíduos de ervas da solução da amostra.</li>
	<li>Utilizar uma pipeta para adicionar 20 ml de solução de amostra ao frasco de amostra para garantir que a solução adicionada de cada vez se encontra à mesma altura. NOTA: Evite contaminação, como impressões digitais, na parte de digitalização do frasco de amostra, certifique-se de que o frasco de amostra esteja limpo e verifique se há arranhões visíveis na superfície do frasco. Ao adicionar a solução da amostra, tenha cuidado para não derramar ou espirrar no frasco da amostra e certifique-se de que o nível de líquido esteja na mesma altura em cada frasco.</li>
</ol>2. Operação do instrumento
<ol><li>Ligue o instrumento de detecção MLS e aqueça-o por 30 minutos.</li>
	<li>Clique no botão Criar arquivo no menu superior (ou clique no botão Arquivo | Nova função de arquivo) para criar um novo arquivo de teste.</li>
	<li>Clique no botão Mostrar temperatura do laboratório Turbiscan no menu superior para definir a temperatura alvo do instrumento para 25 °C. NOTA: A temperatura definida do instrumento deve ser superior à temperatura ambiente; caso contrário, a temperatura da amostra será afetada pela temperatura ambiente.</li>
	<li>Clique em Program Scan no menu superior para entrar no programa de análise de configuração . Adicione o programa à lista e, na barra de tarefas, adicione 5 min como um ciclo, digitalize por 48 h para a sequência de análise e defina o tempo de equilíbrio para 20 min. Selecione este programa de análise para todas as medições subsequentes.</li>
	<li>Mova o frasco de amostra preparado para o sistema de detecção MLS. Depois de configurar o programa, clique em Iniciar para iniciar a medição. NOTA: Tenha cuidado para não agitar o frasco de vidro ao carregar a amostra. A medição só pode ser iniciada após o equilíbrio entre a temperatura da amostra e a temperatura de ajuste.</li>
</ol>3. Configuração do programa de análise de espalhamento de luz múltipla
<ol><li>Após a coleta de dados, clique na lista de parâmetros de cálculo para definir os parâmetros ópticos para calcular o índice de estabilidade (IS), o tamanho das partículas e a velocidade de migração das partículas.</li>
	<li>Defina os parâmetros ópticos da seguinte forma: a intensidade de transmissão de luz de fase contínua (T0) como 99,99% (água), o índice de refração de fase dispersa (np) como 1,36 e o índice de refração de fase contínua (nf) como 1,33.</li>
</ol>

<ol><li>Huang, H. -Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploration+on+the+approaches+of+diverse+sedimentations+in+polyphenol+solutions%3A+An+integrated+chain+of+evidence+based+on+the+physical+phase%2C+chemical+profile%2C+and+sediment+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Exploration on the approaches of diverse sedimentations in polyphenol solutions: An integrated chain of evidence based on the physical phase, chemical profile, and sediment elements.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 1060(2019).</li>
<li>Ran, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+or+low+temperature+extraction%2C+which+is+more+conducive+to+Triphala+against+chronic+pharyngitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+and+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">High or low temperature extraction, which is more conducive to Triphala against chronic pharyngitis.</a> Biomedicine and Pharmacotherapy. 140, 111787(2021).</li>
<li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatoprotective+effects+of+different+extracts+from+Triphala+against+CCl%284%29-induced+acute+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Hepatoprotective effects of different extracts from Triphala against CCl(4)-induced acute liver injury in mice.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 664607(2021).</li>
<li>Huang, H. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+stability+control+strategy+of+Triphala+solution+based+on+the+balance+of+physical+stability+and+chemical+stabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Study on the stability control strategy of Triphala solution based on the balance of physical stability and chemical stabilities.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 158, 247-256 (2018).</li>
<li>Bhattacharya, A., Chatterjee, A., Ghosal, S., Bhattacharya, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+active+tannoid+principles+of+Emblica+officinalis+%28amla%29%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of active tannoid principles of Emblica officinalis (amla).</a> Indian Journal of Experimental Biology. 37 (7), 676-680 (1999).</li>
<li>Chao, P. C., Hsu, C. C., Yin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+and+anti-coagulatory+activities+of+caffeic+acid+and+ellagic+acid+in+cardiac+tissue+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory and anti-coagulatory activities of caffeic acid and ellagic acid in cardiac tissue of diabetic mice.</a> Nutrition and Metabolism. 6, 33(2009).</li>
<li>Tiwari, V., Kuhad, A., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emblica+officinalis+corrects+functional%2C+biochemical+and+molecular+deficits+in+experimental+diabetic+neuropathy+by+targeting+the+oxido-nitrosative+stress+mediated+inflammatory+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Emblica officinalis corrects functional, biochemical and molecular deficits in experimental diabetic neuropathy by targeting the oxido-nitrosative stress mediated inflammatory cascade.</a> Phytotherapy Research. 25 (10), 1527-1536 (2011).</li>
<li>Baliga, M. S., Dsouza, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amla+%28Emblica+officinalis+Gaertn%29%2C+a+wonder+berry+in+the+treatment+and+prevention+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Prevention%22%5BJournal%5D)">Amla (Emblica officinalis Gaertn), a wonder berry in the treatment and prevention of cancer.</a> European Journal of Cancer Prevention. 20 (3), 225-239 (2011).</li>
<li>Rehman, H. -u, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+chemical+constituents+of+Phyllanthus+emblica%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Studies on the chemical constituents of Phyllanthus emblica.</a> Natural Product Research. 21 (9), 775-781 (2007).</li>
<li>Jang, Y., Koh, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+and+storage+stability+of+aronia+anthocyanins+encapsulated+with+combinations+of+maltodextrin+with+carboxymethyl+cellulose%2C+gum+Arabic%2C+and+xanthan+gum%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Characterisation and storage stability of aronia anthocyanins encapsulated with combinations of maltodextrin with carboxymethyl cellulose, gum Arabic, and xanthan gum.</a> Food Chemistry. 405, 135002(2022).</li>
<li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+phenylalanine-modified+magnetic+ferroferric+oxide+nanoparticles+for+ciprofloxacin+removal+from+aqueous+solution%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Colloid+and+Interface+Science%22%5BJournal%5D)">Novel phenylalanine-modified magnetic ferroferric oxide nanoparticles for ciprofloxacin removal from aqueous solution).</a> Journal of Colloid and Interface Science. 632, 345-356 (2023).</li>
<li>Jiang, T., Charcosset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+of+curcumin+within+oil-in-water+emulsions+prepared+by+premix+membrane+emulsification%3A+Impact+of+droplet+size+and+carrier+oil+on+the+chemical+stability+of+curcumin%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Encapsulation of curcumin within oil-in-water emulsions prepared by premix membrane emulsification: Impact of droplet size and carrier oil on the chemical stability of curcumin.</a> Food Research International. 157, 111475(2022).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

A avaliação rápida e precisa da estabilidade da MTC sempre foi um foco da pesquisa da MTC. Para fornecer mais informações úteis para direcionar a melhoria do processo de extração, este estudo analisou os mecanismos de estabilidade e instabilidade de uma amostra usando uma tecnologia não destrutiva no infravermelho próximo.
Nesse protocolo, os parâmetros importantes de estabilidade são calculados com base em dados precisos da varredura da MLS. Os exames de MLS podem coletar a transmissão (T...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65130">Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods</a>. The Authors section was updated from:
Haozhou Huang1 
Mengqi Li2 
Chuanhong Luo3 
Sanhu Fan4 
Taigang Mo4 
Li Han3 
Dingkun Zhang3 
Junzhi Lin5 
1Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Sichuan Nursing Vocational College 
3School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry, State Key Laboratory of Characteristic Chinese Medicine Resources in Southwest China 
4Sanajon Pharmaceutical Group 
5TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
to
Haozhou Huang1,2 
Mengqi Li3 
Chuanhong Luo4 
Sanhu Fan5 
Taigang Mo5 
Li Han4 
Dingkun Zhang4 
Junzhi Lin6 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3Sichuan Nursing Vocational College 
4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Sanajon Pharmaceutical Group 
6TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65130">Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods

Na fabricação da medicina tradicional chinesa (MTC), a estabilidade dos intermediários de extração de MTC e preparações líquidas relacionadas sempre foi o foco da inspeção1. A eficácia clínica dos medicamentos, especialmente com polifenóis como princípio ativo primário, sofre devido a problemas significativos de estabilidade 2,3. Sanajon líquido oral e Nuodikang líquido oral são exemplos de casos típicos desta questão4. Portanto, é crucial aprender a usar ferramentas eficientes para avaliar e otimizar de forma rápida e precisa a estabilidade de intermediários líquidos no processo de produção de MTC. Acredita-se que Phyllanthus emblica L. (PE), uma planta medicinal amplamente difundida no Sudeste Asiático, tenha boas propriedades antioxidantes5, bem como ações anti-inflamatórias6, antibacterianas7 e antitumorais8. Durante o procedimento de extração térmica, os taninos em PE transformam-se violentamente9. Sob catálise com altas temperaturas, esses taninos hidrolisam-se rapidamente para produzir moléculas como o ácido gálico e o ácido elágico, que levam à instabilidade ou precipitação devido à sua baixa solubilidade1. Os métodos atuais para avaliar a estabilidade da MTC, como testes acelerados ou centrifugação, são geralmente complicados 4, o que limita o desenvolvimento de processos de preparaçãopertinentes.
Com base no princípio do espalhamento múltiplo de luz (MLS), estabelecemos um método rápido de avaliação da estabilidade de extratos de PFE e analisamos o mecanismo de instabilidade. MLS é um método de medição baseado na varredura de fontes de luz infravermelha próxima. Qualquer mudança no sistema de solução resulta em uma mudança na intensidade da luz. A luz incidente é espalhada quando é absorvida ou penetrada pelas partículas da amostra. O sistema registra o sinal luminoso de transmissão quando ele passa pela amostra; Se a transmitância da luz da amostra for fraca, o sistema regista o sinal luminoso de retroespalhamento. Em comparação com a observação visual, isso pode economizar muito tempo1 e pode analisar o fenômeno de instabilidade de forma rápida e precisa em detalhes, fornecendo assim informações mais úteis para orientar a otimização do processo de extração.

<table><tbody><tr><td>Jaqueta de aquecimento elétrico ajustável</td><td>Beijing Kewei Yongxing Instrument Co., Ltd</td><td>MH-1000&nbsp;</td><td>www.keweiyq.com</td></tr><tr><td>Balança analítica(1/10000)</td><td>Sartorious, Alemanha</td><td>BSA224S&nbsp;</td><td>www.sartorius.com.cn</td></tr><tr><td>Instrumento ultrassônico CNC</td><td>Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd</td><td>KQ-500DE</td><td>www.ks-csyq.com</td></tr><tr><td>GL-16 centrífuga de alta velocidade</td><td>&nbsp; Sichuan Shuke Instrument Co., Ltd</td><td>18091403</td><td>www.sklxj.com</td></tr><tr><td>Phyllanthus emblica L.</td><td>Mercado de materiais medicinais de Hehuachi</td><td> YJL2004</td><td>Produzido em Yunnan</td></tr><tr><td>Turbisoft Lab instrumento de dispersão de luz múltipla</td><td>Empresa francesa Formulaction Company</td><td>Turbisoft Lab 2.3.1.125 Fanalyser 1.3.5</td><td>www.formulaction.com</td></tr><tr><td>UPR-II-5T dispositivo de água ultrapura</td><td>Sichuan ULUPURE&nbsp; Ultrapure Technology Co., Ltd</td><td>Z16030559</td><td>www.ccdup.com</td></tr></tbody></table>

usando espalhamento múltiplo de luz para examinar a estabilidade de extratos de phyllanthus emblica l. obtidos com diferentes métodos de extração

Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods

O intermediário de extração da medicina tradicional chinesa é o intermediário chave no processo de preparação, e sua estabilidade tem um impacto importante na eficácia e qualidade do produto final. No entanto, os métodos de avaliação de estabilidade existentes são frequentemente demorados e trabalhosos, exigindo observação de longo prazo e a operação de equipamentos complexos (como cromatografia líquida de alta eficiência), e é difícil obter mais informações físicas sobre a instabilidade do sistema. Portanto, há uma necessidade urgente de estabelecer uma tecnologia de análise de estabilidade rápida e precisa para a medicina tradicional chinesa. O espalhamento múltiplo de luz é um método analítico de ponta que pode avaliar com precisão e rapidez a estabilidade de medicamentos tradicionais chineses de uma maneira ambientalmente amigável sem alterar a natureza ou o estado da amostra ou usar reagentes orgânicos.
Neste trabalho, usando dados precisos de varredura de espalhamento múltiplo de luz, o presente protocolo adquiriu rapidamente as curvas de variação para espessura de camada, velocidade de migração de partículas e tamanho médio de partícula ao longo do tempo. Isso permitiu a identificação precisa do mecanismo e das características cruciais que causam a instabilidade do sistema em seus estágios iniciais. É importante ressaltar que o período de pesquisa para o processo de extração pode ser consideravelmente encurtado pela quantificação detalhada da estabilidade do sistema, o que também permite uma análise rápida, precisa e aprofundada dos efeitos de vários processos de extração na estabilidade de Phyllanthus emblica L.

A Figura 1 mostra o princípio da medida da luz múltipla e o significado dos resultados coletados. Nos resultados dos espectros de MLS (Figura 2), a abscissa foi a altura da célula da amostra, e a ordenada foi a intensidade de transmissão (T%) e retroespalhamento (BS%). Através do cálculo dos resultados dos espectros MLS, o sistema pode obter as mudanças nos principais parâmetros físicos da amostra durante o período de medição, incluindo o valor...

Aqui, apresentamos um método de avaliação da estabilidade baseado na tecnologia de espalhamento múltiplo de luz para avaliar a estabilidade de extratos da medicina tradicional chinesa.

Usando Espalhamento Múltiplo de Luz para Examinar a Estabilidade de Extratos de Phyllanthus emblica L. Obtidos com Diferentes Métodos de Extração

The extraction intermediate of traditional Chinese medicine is the key intermediate in the preparation process, and its stability has an important impact ...

Os métodos de avaliação da estabilidade são frequentemente demorados e trabalhosos. Esta técnica pode economizar aproximadamente 200X tempo e coletar muitos parâmetros de estabilidade para extratos de Phyllanthus emblica L.. Esta técnica pode analisar o fenômeno de instabilidade de forma rápida e precisa em detalhes, fornecendo assim informações mais úteis para orientar o otimismo do processo de extração.Para começar, pese com precisão uma quantidade adequada de Phyllanthus emblica L. e adicione água deionizada 10 vezes o peso da planta para extração de refluxo. Após a pesagem, colocar cinco amostras para extração do refluxo, E1 em 0 horas, E2 em 0,5 horas, E3 em 1 hora, E4 em 1,5 horas e E5 em 2 horas. Use uma pipeta para adicionar 20 mililitros de solução de amostra ao frasco de amostra para garantir que a solução adicionada cada vez esteja na mesma altura.Ligue o instrumento de detecção de dispersão múltipla de luz, ou MLS, e aqueça-o por 30 minutos. Clique no botão Criar arquivo no menu superior para criar um novo arquivo de teste e, em seguida, clique no botão Mostrar temperatura do laboratório Turbiscan para definir a temperatura alvo do instrumento para 25 graus Celsius. Clique em Program Scan para entrar no programa de análise de instalação e adicione o programa à lista.Defina o tempo de equilíbrio para 20 minutos. Na barra de tarefas, adicione Scan por 48 horas à sequência de análise e 5 minutos como um ciclo. Selecione este programa de análise para todas as medições subsequentes.Coloque o frasco de amostra preparado no sistema de detecção MLS e clique em Iniciar para iniciar a medição. Após a coleta de dados, clique na lista de parâmetros de cálculo. Defina o índice de refração de fase dispersa para 1,36 e o índice de refração de fase contínua para 1,33 para calcular o índice de estabilidade, o tamanho das partículas e a velocidade de migração de partículas, e defina a fração de volume como 1, e a intensidade de transmissão de luz de fase contínua para os espectros de 99,99% de MLS das amostras de E1 a E5 são mostrados nesta figura.Os dados espectrais sugerem que a amostra E2 flutuou menos, indicando maior estabilidade da amostra, enquanto E1 pode ter tido turbidez devido ao declínio geral da luz de transmissão. As amostras de E3 a E5 foram bastante instáveis, e os dados espectrais das amostras em diferentes alturas foram diferentes, indicando que a estratificação ocorreu no período mais tardio. O valor de T aumenta com o tempo, tornando a amostra mais instável.Para E3 e E4, o nível delta-T retornou ao do estágio anterior no final, indicando que a agregação e a precipitação ocorreram nesses extratos. O delta-T de E5 permaneceu baixo após turbidez, indicando que E5 pode ter tido uma grande quantidade de sedimentação. A tendência no caminho livre de fótons pode refletir as mudanças na luz transmitida da amostra.A estabilidade de vários extratos flutuou continuamente ao longo do tempo. As mudanças dinâmicas no tamanho das partículas revelaram que os tamanhos das partículas de todas as amostras mudaram consideravelmente dentro de 8 a 20 horas, com o tamanho das partículas de E3 e E5 excedendo até mesmo a faixa de medição. A instabilidade dos extratos de Phyllanthus emblica L., obtidos por diferentes métodos de extração, é mostrada aqui.A faixa de cromaticidade no topo de cada resultado representa os valores de intensidade de luz correspondentes a cores diferentes, onde a parte azul representa a transmissão e a parte marrom representa a intensidade do retroespalhamento. A seleção de um programa de análise adequado para as medições e a escolha da lista de parâmetros para o cálculo do índice de estabilidade, do tamanho das partículas e da velocidade de migração das partículas são cruciais para essa partícula, pois essas duas etapas afetarão diretamente a moeda dos resultados. Algumas informações significativas, como a espessura da camada, também podem ser obtidas, e as regras de formação de emulsificação ou precipitação podem ser analisadas.Essa técnica facilitará o desenvolvimento de um modelo de predição de estabilidade baseado em extensos dados de instabilidade de medicamentos. Além disso, essa técnica poderia ser combinada e aprimorada com outros métodos de detecção, ampliando ainda mais as possibilidades de pesquisa.

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Aprenda a avaliar a estabilidade de extratos de Phyllanthus emblica L. usando espalhamento múltiplo de luz. Este método reduz o tempo de análise em 200 vezes e fornece parâmetros abrangentes para otimização de processos.

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Usando Espalhamento Múltiplo de Luz para Examinar a Estabilidade de Extratos de Phyllanthus emblica L. Obtidos com Diferentes Métodos de Extração

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