Name: Transferência mitocondrial via nanotubos de tunelamento entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina in vitro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T13:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprenda a transferência mitocondrial bidirecional entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina via nanotubos de tunelamento. Este método permite rastrear a troca de mitocôndrias e avaliar sua função em resgatar células danificadas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Investigando a transferência mitocondrial em coculturas de MSC e ARPE19

<ol><li>Caprara, C., Grimm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+oxygen+to+erythropoietin%3A+Relevance+of+hypoxia+for+retinal+development%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">From oxygen to erythropoietin: Relevance of hypoxia for retinal development, health and disease.</a> Prog Retin Eye Res. 31 (1), 89-119 (2012).</li>
<li>Ferrington, D. A., Fisher, C. R., Kowluru, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+defects+drive+degenerative+retinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial defects drive degenerative retinal diseases.</a> Trends Mol Med. 26 (1), 105-118 (2020).</li>
<li>Spees, J. L., Olson, S. D., Whitney, M. J., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+between+cells+can+rescue+aerobic+respiration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer between cells can rescue aerobic respiration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1283-1288 (2006).</li>
<li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+from+bone+mesenchymal+stem+cells+protects+against+tendinopathy+both+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer from bone mesenchymal stem cells protects against tendinopathy both in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Res Ther. 14 (1), 104(2023).</li>
<li>Borcherding, N., Brestoff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+power+and+potential+of+mitochondria+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The power and potential of mitochondria transfer.</a> Nature. 623 (7986), 283-291 (2023).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondrial+transfer+as+a+means+of+tissue+revitalization%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondrial transfer as a means of tissue revitalization.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 65(2021).</li>
<li>Rustom, A., Saffrich, R., Markovic, I., Walther, P., Gerdes, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotubular+highways+for+intercellular+organelle+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Nanotubular highways for intercellular organelle transport.</a> Science. 303 (5660), 1007-1010 (2004).</li>
<li>Cordero Cervantes, D., Zurzolo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peering+into+tunneling+nanotubes-the+path+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+j%22%5BJournal%5D)">Peering into tunneling nanotubes-the path forward.</a> Embo j. 40 (8), e105789(2021).</li>
<li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functions%2C+methods%2C+and+mobility+of+mitochondrial+transfer+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">The functions, methods, and mobility of mitochondrial transfer between cells.</a> Front Oncol. 11, 672781(2021).</li>
<li>Jiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+crosstalk+between+mesenchymal+stem+cells+and+various+ocular+cells+through+the+intercellular+trafficking+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic crosstalk between mesenchymal stem cells and various ocular cells through the intercellular trafficking of mitochondria.</a> Theranostics. 10 (16), 7260-7272 (2020).</li>
<li>Domhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+communication+by+exchange+of+cytoplasmic+material+via+tunneling+nano-tube+like+structures+in+primary+human+renal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intercellular communication by exchange of cytoplasmic material via tunneling nano-tube like structures in primary human renal epithelial cells.</a> PLoS One. 6 (6), e21283(2011).</li>
<li>Zhang, J., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+nanotubes%3A+Novel+communication+between+distant+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Membrane nanotubes: Novel communication between distant cells.</a> Sci China Life Sci. 56 (11), 994-999 (2013).</li>
<li>Cheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipscs+derived+astrocytes+rescue+rotenone-induced+mitochondrial+dysfunction+and+dopaminergic+neurodegeneration+in+vitro+by+donating+functional+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Human ipscs derived astrocytes rescue rotenone-induced mitochondrial dysfunction and dopaminergic neurodegeneration in vitro by donating functional mitochondria.</a> Transl Neurodegener. 9 (1), 13(2020).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+regulates+intercellular+mitochondrial+transport+%26+enhances+mesenchymal+stem+cell+rescue+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Miro1 regulates intercellular mitochondrial transport & enhances mesenchymal stem cell rescue efficacy.</a> Embo J. 33 (9), 994-1010 (2014).</li>
<li>Li, C. J., Chen, P. K., Sun, L. Y., Pang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+mitochondrial+transfer+by+antioxidants+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Enhancement of mitochondrial transfer by antioxidants in human mesenchymal stem cells.</a> Oxid Med Cell Longev. 2017, 8510805(2017).</li>
<li>Paliwal, S., Chaudhuri, R., Agrawal, A., Mohanty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+abilities+of+mesenchymal+stem+cells+through+mitochondrial+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Regenerative abilities of mesenchymal stem cells through mitochondrial transfer.</a> J Biomed Sci. 25 (1), 31(2018).</li>
<li>Lin, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+of+wharton%27s+jelly+mesenchymal+stem+cells+eliminates+mutation+burden+and+rescues+mitochondrial+bioenergetics+in+rotenone-stressed+melas+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer of wharton's jelly mesenchymal stem cells eliminates mutation burden and rescues mitochondrial bioenergetics in rotenone-stressed melas fibroblasts.</a> Oxid Med Cell Longev. 2019, 9537504(2019).</li>
<li>Hu, X., Duan, T., Wu, Z., Xiong, Y., Cao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondria+transfer%3A+A+new+perspective+for+the+treatment+of+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Biophys+Sin+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondria transfer: A new perspective for the treatment of metabolic diseases.</a> Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 53 (7), 958-960 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldeído</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 6 poços</td><td>NEST</td><td>703001</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 poços</td><td>NEST</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>Células ARPE19</td><td>ATCC</td><td>CRL-2302</td><td>Linhas celulares</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>Beyotime</td><td>ST025</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace violet</td><td>Invitrogen</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>Corrediça de cobertura</td><td>NEST</td><td>801007</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>C141905005BT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12-GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10565-042</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovino Soro (FBS)</td> <td>VivaCell</td><td>C04002-500</td><td></td></tr><tr><td>FluorSave Reagente</td><td>Millipore</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>MSCs</td><td>Nuwacell</td><td>RC02003</td><td>Linhas celulares</td></tr><tr><td>ncMissão</td><td>mostrada em</td><td>caneta RP02010</td><td></td></tr><tr><td>Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>pCT-Mito-GFP</td><td>SBI</td><td>CYTO102-PA-1</td><td>Plasmídeo; A partir de&nbsp; https://www.systembio.com/mitochondria-cyto-tracer-pct-mito-gfp-cmv</td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>MCE</td><td>HY-B1743A</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Axygen</td><td>TF-1000-R-S</td><td></td></tr><tr><td>Faloidina</td><td>Invitrogen</td><td>A22287</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Placa Transwell</td><td>Corning</td><td>3470</td><td></td></tr></tbody></table>

transferência mitocondrial via nanotubos de tunelamento entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina in vitro

Mitochondrial Transfer Via Tunneling Nanotubes Between Mesenchymal Stem Cells and Retinal Pigment Epithelium In Vitro

O diagrama esquemático que ilustra a co-cultura direta de células-tronco mesenquimais (MSC) e células ARPE19 é representado na Figura 1. MSCs, projetadas para expressar mito-GFP, como células doadoras e células ARPE19-mito-RFP com membranas citoplasmáticas marcadas com violeta como células receptoras foram co-cultivadas na proporção de 1:1. Após um período de co-cultura de 24 horas, as células foram coradas para faloidina e examinadas por microscopia confocal. As populações de células resultantes incluíram células MSC-mito-GFP, células ARPE19-mito-RFP, células ARPE19-mito-RFP contendo mito-GFP e células MSC-mito-GFP contendo mito-RFP. Notavelmente, a presença de mito-GFP em células ARPE19 e mito-RFP em MSCs sugeriu transferência bidirecional mitocondrial.
Detalhes específicos da formação de TNT são apresentados na Figura 2. Essas estruturas podem estabelecer conexões intercelulares entre células do mesmo tipo (Figura 2A-C), bem como entre células de diferentes tipos (Figura 2D). Os nanotubos de tunelamento (TNTs) servem como conduítes que conectam células adjacentes, exibindo uma estrutura de membrana distinta rica em F-actina com extremidades abertas facilitando a continuidade citoplasmática e o transporte de mitocôndrias. Utilizando imagens do eixo Z, é evidente que os TNTs não estão firmemente ancorados na matriz extracelular, mas sim suspensos dentro do meio de cultura, distinguindo-os das protrusões celulares convencionais. A transferência mitocondrial é evidente na Figura 3, onde as células ARPE19 positivas para violeta exibem fluorescência dispersa e pontilhada em verde indicativa de mitocôndrias originárias de MSCs (Figura 3A). As MSCs violeta-negativas contendo fluorescência pontilhada em vermelho representam a transferência mitocondrial das células ARPE19 ( Figura 3B ). A Figura 4 mostra a formação de TNT e a transferência mitocondrial sob imagens de super-resolução, a partir das quais podemos ver mais detalhes da transferência mitocondrial via TNT. O vídeo 1 mostra a dinâmica do transporte mitocondrial através do TNT.
Para demonstrar ainda mais que o pré-requisito para a transferência mitocondrial é o contato físico, como o TNT, em vez da secreção e captação mitocondrial, usamos um método de co-cultura relatado anteriormente10. Conforme mostrado na Figura 5A, as células MSCs e ARPE19 foram semeadas nas câmaras superior e inferior de uma placa transwell, respectivamente. Eles foram separados por um filtro com poros de 0,4 μm, que bloqueou o contato direto entre as CTMs e as células ARPE19, mas permitiu a passagem das mitocôndrias. Após 24 h de co-cultura, as células ARPE19 na câmara inferior foram testadas e pouca mito-GFP foi observada nas MSCs na câmara superior (Figura 5B). Esses resultados sugerem que a transferência mitocondrial requer contato direto entre MSCs e células ARPE19.
Por fim, foi realizada a quantificação da formação de TNT e transferência mitocondrial, com os resultados correspondentes representados na Figura 6. As MSCs foram significativamente mais capazes de doar mitocôndrias do que as células ARPE19 (p = 0,0286). Esses achados indicam que as MSCs possuem a capacidade de transferir mitocôndrias para as células epiteliais pigmentares da retina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig01.jpg"> Figura 1: Visão esquemática da co-cultura de células MSCs e ARPE19. As MSCs que expressam células mito-GFP e ARPE19-mito-RFP marcadas com CellTrace Violet são co-cultivadas por 24 h na proporção de 1:1. Mito-GFP em células violeta + marca a transferência de mitocôndrias de MSCs para células ARPE19, enquanto Mito-RFP em células violeta marca a transferência de mitocôndrias de células ARPE19 para MSCs. Abreviaturas: GFP = proteína fluorescente verde; RFP = proteína fluorescente vermelha; CTMs = células-tronco mesenquimais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig02.jpg"> Figura 2: Formação de TNT entre MSCs e células ARPE19. As pontas das setas brancas indicam a formação de TNT, as pontas das setas verdes indicam mitocôndrias com mito-GFP e as pontas das setas vermelhas indicam mitocôndrias com mito-RFP. (A, B) Formação de TNT entre as células ARPE19. (C) Formação de TNT entre MSCs. (D) Formação de TNT entre MSCs e células ARPE19. Imagem do eixo Z mostrando TNTs suspensos em meio de cultura. Barras de escala = 25 μm. Abreviaturas: MSCs = células-tronco mesenquimais; TNTs = nanotubos de tunelamento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig03.jpg"> Figura 3: Transferência mitocondrial de MSCs para células ARPE19. (A) O círculo tracejado branco indica transferência mitocondrial (mito-GFP) de MSCs para células ARPE19, e (B) o círculo tracejado amarelo indica transferência mitocondrial (mito-RFP) de células ARPE19 para MSCs. Barras de escala = 20 μm. Abreviatura: GFP = proteína fluorescente verde; RFP = proteína fluorescente vermelha; CTMs = células-tronco mesenquimais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig04.jpg"> Figura 4: Formação de TNT e transferência mitocondrial entre MSCs e células ARPE19 por microscopia de super-resolução. (A e B) Transporte mitocondrial de MSCs para células ARPE19. (C) Detalhe de TNTs sob imagens de super-resolução. (D) Mitocôndrias verdes de MSCs presentes em células ARPE19 sob imagens de super-resolução. Barra de escala = 5 μm. Abreviaturas: MSCs = células-tronco mesenquimais; TNTs = nanotubos de tunelamento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig05.jpg"> Figura 5: Transferência mitocondrial quase indetectável em co-cultura indireta em sistema transwell de MSCs e células ARPE19. (A) Visão esquemática da co-cultura de MSCs e células ARPE19 em sistema transwell. (B) Imagens representativas de células ARPE19 no fundo da placa transwell após co-cultura indireta com MSCs por 24 h. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig06.jpg"> Figura 6: Quantificação da formação de TNT e transferência mitocondrial. (A) formação de TNT, (B) transferência mitocondrial. Abreviaturas: M = MSCs = células-tronco mesenquimais; A = células ARPE19; TNTs = nanotubos de tunelamento; M-A = formação de TNT entre MSCs e células ARPE19; M-M = formação de TNT entre MSCs; AA = formação de TNT entre as células ARPE19. n = 4, média ± DP, teste U de Mann-Whitney, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Figura Suplementar S1: Mapeamento do plasmídeo pCT-Mito-copGFP. Mito-GFP (CYTO102-PA-1) foi adquirido. O cito-rastreador de mitocôndrias, pCT-Mito-GFP (CMV), se funde com copGFP por meio de uma etiqueta Cox8, resultando na marcação de mitocôndrias com copGFP. Essa fusão copGFP é impulsionada pelo promotor do CMV, permitindo uma expressão robusta em linhagens celulares como HeLa, HEK293 e HT1080. O mito-RFP foi modificado do mito-GFP, substituindo o GFP por RFP; ele carrega um gene de resistência à puromicina. O empacotamento lentiviral deste plasmídeo é feito por empresas especializadas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_Supplementary%20figure.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Vídeo 1: Transporte mitocondrial mediado por TNT entre MSCs e células ARPE19. O TNT é gerado através do movimento bidirecional das células MSC e ARPE19, facilitando a transferência de mitocôndrias das células MSC para as células ARPE19. Abreviaturas: MSCs = células-tronco mesenquimais; TNTs = nanotubos de tunelamento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_TNT_Video.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>

Transferência mitocondrial via nanotubos de tunelamento entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina in vitro

Mitochondrial transfer is a normal physiological phenomenon that occurs widely among various types of cells. In the study to date, the most important ...

mitochondrial-transfer-via-tunneling-nanotubes-between-mesenchymal

Research

JoVE Journal

Biology

Neste vídeo, é demonstrado um método para permitir a transferência de mitocôndrias marcadas com fluorescência para células-tronco de glioblastoma (GSCs) por meio de centrifugação. A captação bem-sucedida e a integração funcional das mitocôndrias do doador são confirmadas pela detecção da fluorescência usando microscopia confocal.

Transferência mitocondrial assistida por centrifugação para células-tronco de glioblastoma

Aqui apresentamos um protocolo aceito pela comunidade em formato multimídia para injeção sub-retina de um bolus de células RPE em ratos e camundongos. Essa abordagem pode ser usada para determinar potenciais de resgate, perfis de segurança e capacidades de sobrevivência de células RPE enxertadas após implantação em modelos animais de degeneração retiniana.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

Aqui, um protocolo (MitoCeption) é apresentada para transferir mitocôndrias, isolado a partir de células estaminais mesenquimais humanas (MSC), para células estaminais glioblastoma (GSC), com o objectivo de estudar os seus efeitos biológicos sobre o metabolismo SGC e funções. Um protocolo semelhante pode ser adaptado para transferir as mitocôndrias entre outros tipos de células.

MitoCeption: Transferir humano isolado MSC mitocôndrias de células-tronco Glioblastoma

Nós descrevemos um método para engenheiro um retina tecido composto de células epiteliais de pigmento retinal derivadas de células-tronco pluripotentes humanas cultivadas em cima de membrana amniótica humana e sua preparação para enxertia em modelos animais.

Engenharia de tecido de epitélio do pigmento da retina transplante-apropriado derivado de células estaminais embrionárias humanas

Descrevemos um protocolo detalhado para a preparação de células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC pós-criopreservadas e a liberação sub-retiniana dessas células em camundongos rd10 .

Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10

Aqui, é apresentado um protocolo padronizado para visualizar nanotubos de tunelamento entre queratinócitos epidérmicos humanos e fibroblastos dérmicos usando marcação por membrana e F-actina com imagem confocal z-stack, com co-coloração opcional α-tubulina, permitindo detecção reprodutível e caracterização do citoesqueleto para aplicações de engenharia de tecidos.

Método Padronizado para Detectar Nanotubos de Tunelamento em Células de Pele Humana para Aplicações de Engenharia de Tecidos

Objetivo da apresentação é mostrar um método altamente reprodutível para gerar matriz associada implantes de células-tronco em defeitos da cartilagem, que pode ser visualizado com ressonância magnética. As células estaminais são rotulados com FDA-approved Ferumoxides, misturado com agarose, implantado em defeitos da cartilagem e fotografada com um scanner MR 7T.

Implantação de Ferumoxides identificadas células-tronco mesenquimais em defeitos da cartilagem

Um método simples é descrito para a indução de células epiteliais para mesenquimal (EMT) em uma variedade de tipos de células. Métodos de análise de células em EMT estados por imunocitoquímica estão incluídos.

Indução e Análise de epitelial para mesenquimal Transição

O microRNA (miRNA) perfis de tronco humanas pluripotentes induzidas por células (iPS), epitélio pigmentar da retina (RPE) derivadas humana induzida por células-tronco pluripotentes (iPS) (IPS-RPE) e RPE fetal, foram comparados.

Perfis de expressão de microRNA iPS Human Cells, Retinal Pigment Epithelium Derivado de Ips, e Fetal Retinal Pigment Epithelium

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Aprenda a transferência mitocondrial bidirecional entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina via nanotubos de tunelamento. Este método permite rastrear a troca de mitocôndrias e avaliar sua função em resgatar células danificadas.

Transferência mitocondrial via nanotubos de tunelamento entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina in vitro (Vídeo) | JoVE Journal

Transferência mitocondrial via nanotubos de tunelamento entre células-tronco mesenquimais e epitélio pigmentar da retina in vitro

Explorar mais vídeos