Name: Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T16:25:00.000+00:00
Duration: 14 min 34 s
Description: Aprenda um protocolo cirúrgico para criar uma janela craniana resselável em camundongos, permitindo registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão.

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<table><tbody><tr><td>& micro; Matriz ECoG & mdash; 512 canais personalizados (2 e vezes 256 ch)</td><td>NeuroNexus</td><td>E256-200-30-80</td><td>Embalagem: IH256. Dois 16 vezes; 16 sub-grades (cada uma com 3,3 mm e vezes 3,5 mm); 200 & mu; m pitch; 80 & mu; diâmetro do eletrodo m. Gravações DMN em nível superficial.</td></tr><tr><td>Braço micromanipulador esquerdo de 3 eixos</td><td>Instrumentos de Precisão Mundial (WPI)</td><td>504926</td><td>10 & mu; resolução m; display digital; Usado para posicionamento da placa/sonda durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Tampa protetora impressa em 3D</td><td>Interno (Anycubic Photon Mono 4K)</td><td>N/A</td><td>Design personalizado; impressa em resina UV Anycubic High Clear; Arquivo STL disponível em https://github.com/RazBalin/ProtectiveDMN_Cap</td></tr><tr><td>Acetona (grau laboratorial)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>179973</td><td>Degrasamento da superfície do crânio e remoção do periósteo antes da aplicação do adesivo</td></tr><tr><td>Gancho Adson Dura 5 mm (Gancho Dura fino)</td><td>gSource</td><td>gS 25.2570</td><td>Usado para descolar a placa óssea da dura-máter ao longo do perímetro; Fabricado com fio fino de tungstênio ou similar</td></tr><tr><td>Resina UV Anycubic High Clear</td><td>Anycubic</td><td>STMGCL-102B&nbsp;</td><td>Resina fotopolimérica usada com impressora Anycubic Photon Mono 4K para tampas protetoras impressas em 3D</td></tr><tr><td>Anycubic Photon Mono impressora de resina 3D</td><td>Anycubic</td><td>PHOTON-MONO-4K</td><td>Usado para imprimir tampas de janelas protetoras a partir da Anycubic High Clear Resin</td></tr><tr><td>Lavagem & Lavagem de Resina UV Anycubic Máquina de Cura 2.0</td><td>Anycubic</td><td>285-550</td><td>Lavagem pós-impressão e cura UV de tampas impressas em 3D</td></tr><tr><td>Braço articulado com base magnética (&times; 2)</td><td>Ferramentas Haas</td><td>09-0535</td><td>Costumava manter e micrometer; Sub-redes ECoG posicionadas na superfície cortical durante as gravações</td></tr><tr><td>LCR artificial (aCSF)</td><td>Preparação interna</td><td>N/A (Internamente)</td><td>receita de aCSF: 124 mM NaCl, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 2 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 1,25 mM KH2PO4, 10 mM de D-Glicose; oxigenar com 95% de O2 / 5% CO2 imediatamente após a preparação. Números de catálogo listados separadamente.</td></tr><tr><td>Lâmina microcirúrgica romba (bisturi circular)&nbsp;</td><td>Iogen</td><td>374769</td><td>Usado para raspagem da superfície do crânio e remoção de capas</td></tr><tr><td>Buprenorfina (Temgesica)</td><td>Indivíduo</td><td>BE-112515</td><td>analgésico opioide; 0,05 mg/kg s.c. pré-operatório</td></tr><tr><td>Mouses C57BL/6JRj</td><td>Janvier Labs</td><td></td><td>Masculino ou feminino; mínimo 10 semanas de idade, >20 g de peso corporal no momento da cirurgia</td></tr><tr><td>Diidratado de Cloreto de Cálcio (CaCl2&middot; 2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-7902</td><td>2 mM; MW 147.02; 0,29 g/L. Preparado como Ca &times; 100 ações. Componente da aCSF interna.</td></tr><tr><td>Carprofeno (Rimadyl)</td><td>Zoetis Saúde Animal</td><td>RXRIM-INJ&NBSP;</td><td>Analgésico AINE; 5 mg/kg de s.c. pré-operatório</td></tr><tr><td>Corticosterona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2505</td><td>Dissolvido em água potável para um modelo de estresse crônico/depressão de 21 dias</td></tr><tr><td>Cotonete</td><td>&nbsp; Fisherbrand</td><td>&nbsp; 22-363-157&nbsp;</td><td>Serve como cabo para dispositivo de durapunção 30 G e para desengraxar a superfície do crânio com acetona</td></tr><tr><td>Cola de cianoacrilato &mdash; Loctite 401</td><td>Adesivos Henkel</td><td>Loctite 401</td><td>Cianoacrilato de viscosidade fina; Usado para priming da superfície do crânio, fixação de placas de cabeça e tampas</td></tr><tr><td>Broca dentária & mdash; Foredom K.1070</td><td>Antepassado</td><td>K.1070</td><td>Broca rotativa de eixo flexível; Usado para afinamento de craniotomia e perfuração de furos piloto</td></tr><tr><td>Dexametasona</td><td>Dopharma</td><td>1DEX004</td><td>anti-inflamatório corticosteroide; 2 mg/kg de s.c. pré-operatório</td></tr><tr><td>D-Glicose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7021</td><td>10 mM; MW 180.20; 1,80 g/L. Preparado como glicose e tempos; 100 ações. Componente da aCSF interna.</td></tr><tr><td>Broca de Aço Bur redonda 1/007W</td><td>Hager & Meisinger</td><td>18089</td><td>Usado para o local de referência e a janela craniana</td></tr><tr><td>Etanol 80% (v/v) - A12t diluto</td><td>Berner</td><td>13221132</td><td>Imersão pré-operatória de instrumentos cirúrgicos e capuz laminar cirúrgico para esterilização</td></tr><tr><td>Aparelho de Evacuação de Gás</td><td>Ciências da Vida RWD</td><td>R546W</td><td>Elimina gases anestésicos da área cirúrgica</td></tr><tr><td>Soquete de referência banhado a ouro</td><td>DigiKey</td><td>310-13-102-41-001000</td><td>Implantado sobre o cerebelo esquerdo; serve como terra/referência do ECoG</td></tr><tr><td>Limpeza Ultrassônica GRANT & mdash; Modelo 17002A</td><td>Instrumentos GRANT</td><td>17002A</td><td>EAN: 4064343191654. Banho ultrassônico com água quente; usado com o TICKOPUR TR 3 para limpeza de instrumentos</td></tr><tr><td>Bolsa térmica e mdash; Supertech TMP-5B</td><td>Supertech</td><td>TMP-5B</td><td>Mantém a temperatura corporal em 37 °C; C durante a anestesia</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td>66794-017-25</td><td>Anestésico inalável; indução 4%, manutenção 1,5 e NDASH; 2.5%</td></tr><tr><td>Kimtech Science, Lenços Precisos (Tecido não fibroso)</td><td>KIMBERLY CLARK</td><td>7552</td><td>Usado com ponta pontiaguda para secar o ACSF residual e auxiliar na adesão da membrana do PDMS à dura-máter</td></tr><tr><td>Selante Elastômero Estéril Kwik-Cast</td><td>Instrumentos de Precisão Mundial (WPI)</td><td>KWIK-CAST-s</td><td>Modelo: KWIK-CAST-S. silicone biocompatível; usado para criar vedação removível ao redor da membrana PDMS.&nbsp;</td></tr><tr><td>Caneta de cura UV LED 405 nm</td><td>CureUV</td><td>514424-405</td><td>Usado para curar cimento dentário ativado por UV (C-Ram total) durante a implantação</td></tr><tr><td>Solução de lidocaína-epinefrina</td><td>Orion Pharma</td><td>05 10 31</td><td>Anestésico local; injeção de s.c. sob a pele do couro cabeludo</td></tr><tr><td>Sulfato de Magnésio heptahidratado (MgSO4&middot; 7H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-7774</td><td>1 mM; MW 246,48; 0,25 g/L. Preparado como Mg &tempos; 100 ações. Componente da aCSF interna.</td></tr><tr><td>Placa de metal e mdash; Neurotar Modelo 13</td><td>Neurotar</td><td>Modelo 13</td><td>Placa de titânio; abertura redonda de 11 mm de diâmetro; fixado ao crânio com cianoacrilato e cimento dentário</td></tr><tr><td>Adaptador headstage NeuroNexus )</td><td>NeuroNexus</td><td>IH256 personalizado 64 e vezes; 4 Molex&nbsp;</td><td>Placa adaptadora personalizada; sanduíches cada um & micro; Subgrade ECoG entre dois headstages Intan RHD 128-ch</td></tr><tr><td>Sonda Neuropixels 1.0 com tampa metálica (e os tempos; 2)</td><td>IMEC</td><td>PRB_1_4_0480_1_C</td><td>960 locais de gravação; Haste de 10 mm. Uma sonda mira na coluna hipocampal-talâmico-visual, a outra na coluna mPFC</td></tr><tr><td>Chassi NI PXIe-1083</td><td>Instrumentos Nacionais</td><td>PXIe-1083</td><td>Chassi PXI Express de 9 ranhuras que abriga módulo Neuropixels e placas NI DAQ</td></tr><tr><td>NI PXIe-3839 módulo multifuncional de E/S</td><td>Instrumentos Nacionais</td><td>PXIe-3839</td><td>Instalado no chassi NI PXIe-1083; usado para sincronização e E/S auxiliar</td></tr><tr><td>DAQ multifuncional NI PXIe-6363</td><td>Instrumentos Nacionais</td><td>PXIe-6363</td><td>Instalado no chassi NI PXIe-1083; E/S analógica e digital para sincronização</td></tr><tr><td>Nova Microcinerator -&nbsp; Esterilizador Infravermelho</td><td>Argos Tech</td><td>S3022</td><td>Usado para esterilização rápida de qualquer instrumento que possa tocar tecidos cerebrais expostos</td></tr><tr><td>Microscópio binocular estéreo Olympus SZ51</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td>Visualização cirúrgica; Usado durante as etapas de craniotomia e implantação</td></tr><tr><td>Quadro de Aquisição Open Ephys (One Box, 1ª geração)</td><td>Open Ephys</td><td>OEPS-9029</td><td>Recebe &micro; Fluxos de dados ECoG via SPI; Hardware de código aberto. Veja open-ephys.org</td></tr><tr><td>Interface gráfica aberta do Ephys</td><td>Open Ephys</td><td>N/A (código aberto)</td><td>Software gratuito e de código aberto para aquisição de eletrofisiologia. Disponível em: open-ephys.org</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio (KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5405</td><td>3 mM; MW 74.55; 0,22 g/L. Componente do aCSF interno.</td></tr><tr><td>Dihidrogênio fosfato de potássio (KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5655</td><td>1,25 mM; MW 136.09; 0,17 g/L. Componente do aCSF interno (Klebs & times; 10 ações).</td></tr><tr><td>Solução de povidona-iodo (BETADINE)</td><td>Takeda</td><td>45 70 28</td><td>Desinfetante tópico para preparação cirúrgica no campo</td></tr><tr><td>Módulo de aquisição PXIe</td><td>Neuropixels</td><td>PXIE_1000</td><td>módulo em formato PXI para aquisição de dados Neuropixels 1.0; instalado no chassi NI PXIe-1083</td></tr><tr><td>Conector de soquete de referência</td><td>DigiKey</td><td>342-10-102-00-591000</td><td>Conector correspondente para o soquete de referência acima; confirme o número da peça com a DigiKey</td></tr><tr><td>RHD 128 canais (e horários; 4)</td><td>Tecnologias Intan</td><td>RHD 128</td><td>Dois headstages por &micro; Subgrade ECoG; confirmar modelo (por exemplo, RHD2132 ou RHD2164)</td></tr><tr><td>Cabo de interface RHD SPI, 0,9 m</td><td>Tecnologias Intan / Open Ephys</td><td>C3203</td><td>Cabo SPI padrão conectando headstages RHD à caixa de aquisição Open Ephys</td></tr><tr><td>Bomba de Ar RWD</td><td>Ciências da Vida RWD</td><td>R510-29</td><td>Fornece fluxo de ar através do circuito anestésico</td></tr><tr><td>Vaporizador de Anestesia Animal RWD</td><td>Ciências da Vida RWD</td><td>R5835</td><td>Vaporizador de isoflurano de precisão para indução e manutenção da anestesia</td></tr><tr><td>Lâmina do Bisturi #11</td><td>Swann Morton</td><td>SM0103</td><td>Usado para gravar padrões cruzados na superfície do crânio para melhorar a aderência adesiva</td></tr><tr><td>Aparador de pelos para pequenos animais - GT416</td><td>Aesculap Schermaschinen GmbH</td><td>D-98528H</td><td>Usado para aparar o couro cabeludo do animal antes da cirurgia</td></tr><tr><td>Bicarbonato de Sódio (NaHCO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-5761</td><td>26 mM; MW 84.01; 2,18 g/L. Componente do aCSF interno.</td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-5886</td><td>124 mM; MW 58.44; 7,25 g/L. Componente do aCSF interno.</td></tr><tr><td>SOL-M (Agulha hipodérmica estéril 30 G)</td><td>Europa Sol-Millennium</td><td>113005</td><td>Curvado 90º e grau; na ponta e fixada no cotonete para criar o dispositivo de punção dura-dura</td></tr><tr><td>Braço manipulador padrão, 3 eixos ESQUERDA (Stoelting)</td><td>Stoelting Co.</td><td>51604</td><td>Usado para inserção de sondas Neuropixels durante sessões de gravação</td></tr><tr><td>Braço manipulador padrão, 3 eixos DIREITO (Stoelting)</td><td>Stoelting Co.</td><td>51606</td><td>Usado para inserção de sondas Neuropixels durante sessões de gravação</td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico & mdash; RWD F67001</td><td>Ciências da Vida RWD</td><td>F67001</td><td>quadro estereotáxico padrão; Usado para estabilização da cabeça e colocação de implantes referenciada por coordenadas</td></tr><tr><td>Caneta de pele com marcador cirúrgico e régua (Tinta Violeta)</td><td>Fannin</td><td>SM0372</td><td>Marcador cirúrgico cutâneo biocompatível à base de genciana-violeta usado para delinear a craniotomia planejada e a pegada do implante no osso. Resistente à preparação de cianoacrilato (Loctite 401) e permanece visível por meio da desengraxação do crânio e fixação da cabeça, permitindo a transferência confiável das coordenadas estereotáxicas para a superfície óssea.</td></tr><tr><td>Kit de Elastomer de Silicone SYLGARD 184 (PDMS)</td><td>Dow (Alemanha)</td><td>1673921</td><td>Polidimetilsiloxano; fundido em thin (< membranas de 1 mm; colocado na superfície dural para proteger o cérebro</td></tr><tr><td>Detergente enzimático Tergazyme</td><td>Alconox</td><td>1304-1</td><td>Limpador à base de protease usado a 1% (p/v) em água RO morna para limpeza pós-sessão com eletrodos (45 min de molho, depois enxágue triplo em água purificada).</td></tr><tr><td>Cimento Dental UV Total C-Ram Automix (Branco)</td><td>Itena</td><td>R301950</td><td>Modelo: TTCRAM-BLC. resina dentária curável por UV; Usado para reforço de placa de cabeça e fixação de soquete</td></tr><tr><td>Solução de Limpeza Ultrassônica (TICKOPUR TR 3)</td><td>&nbsp;Dr. H. Stamm GmbH</td><td>TR-3-913&nbsp;</td><td>Concentrado à base de ácido cítrico; Usado em banho ultrassônico para limpeza de instrumentos pós-cirúrgicos</td></tr><tr><td>Gel Ocular Viscotears 2 mg/g</td><td>Alcon</td><td>503849</td><td>Pomada lubrificante à base de carbomeros; aplicada nas córneas durante a anestesia para evitar o ressecamento</td></tr><tr><td>Fonte de Luz Fria Zeiss KL1500 LCD</td><td>Carl Zeiss</td><td>KL1500 LCD</td><td>Iluminação a frio por fibra óptica para campo cirúrgico; previne danos térmicos</td></tr></tbody></table>

protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

Surgical Protocol for a Large, Resealable Cranial Window Enabling Longitudinal, Multi-Modal Electrophysiology Recordings of Mouse Default Mode Network

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

The default mode network (DMN) is a central, large-scale brain network implicated in a range of cognitive functions and neuropsychiatric disorders, such ...

surgical-protocol-for-large-resealable-cranial-window-enabling

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Descrevemos os métodos de larga escala de gravação de várias unidades e potencial de campo local, comportando roedores com sondas de silício. Unidade de fabricação, o apego sonda para a unidade e os processos de implantação de teste são ilustrados em detalhes suficientes para a replicação fácil.

Em larga escala de gravação de Neurônios por sondas de silicone móveis em Comportando Roedores

Um procedimento é descrito para manipular a actividade de neurónios piramidais corticais cerebrais optogenetically enquanto o electroencefalograma, electromiograma, e concentração do lactato cerebral são monitorados. Gravações experimentais são realizados em ratinhos de cabo-cativos, enquanto eles sofrem espontâneas do sono / vigília ciclos. Optogenética equipamento é montado no nosso laboratório, o equipamento de gravação encontra-se comercialmente disponível.

Eletroencefalografia simultânea, em tempo real de medição da concentração de lactato e Manipulação optogenética da atividade neuronal do córtex cerebral de roedores

Este método cria um ambiente tangível, familiar para o mouse para navegar e explorar durante o exame ou unicelulares microscópicos registros eletrofisiológicos, que exigem a fixação firme da cabeça do animal.

Plataforma Ar levantou Flat-pavimentado: Um Novo Método para Combinando Comportamento com Microscopia ou Eletrofisiologia em Awake Roedores movendo-se livremente

Este protocolo apresenta um método para a criação de um grande craniotomia unilateral sobre as regiões temporal e parietal do córtex cerebral do rato. Isto é especialmente útil para imagens em tempo real sobre uma área extensa de um hemisfério cortical.

Um Procedimento craneotomia Lateral Grande para Wide-campo Mesoscale imagens ópticas de atividade cerebral

Apresentado aqui é um protocolo para a implantação de uma janela craniana crônica para a imagem longitudinal de células cerebrais em camundongos acordados e com a cabeça.

Implantação de uma janela craniana para imagem repetida em vivo em ratos acordados

Aqui, apresentamos o método de fabricação de um sistema optrode com fibras ópticas para entrega de luz e uma matriz de eletrodos para gravação neural. Experimentos in vivo com camundongos transgênicos expressando channelrhodopsin-2 mostram a viabilidade do sistema para estimulação optogenética simultânea e gravação eletrofisiológica.

Oprode Array para modulação optogenética simultânea e gravação neural elétrica

Um sistema de registro eletrencefalográfico de baixo custo combinado com uma bobina de tamanho milimétrico é proposto para conduzir a estimulação magnética transcraniana do cérebro de camundongos in vivo. Usando eletrodos de parafuso convencionais com um substrato multieletrodo personalizado, flexível e com arranjo de eletrodos, o registro multi-site pode ser realizado a partir do cérebro de camundongos em resposta à estimulação magnética transcraniana.

Sistema de Gravação Eletroencefalográfica de Baixo Custo Combinado com uma Bobina de Tamanho Milimétrico para Estimular Transcranialmente o Cérebro de Camundongos In Vivo

Desenvolvemos uma abordagem simplificada e econômica para a fabricação de eletrodos e realizamos gravações de sinais em várias regiões em camundongos em movimento livre. A utilização da optogenética, juntamente com a eletrofisiologia multirregional e o registro do sinal de cálcio, permitiu a revelação de atividades neuronais em todas as regiões do modelo de acendimento de convulsões.

Um método integrado para criar otérios eletrofisiológicos flexíveis e convenientes para gravação in vivo em várias regiões

Este protocolo descreve um método para obter gravações in vivo de neurônio único de alta densidade do tronco cerebral de camundongos com cabeça fixa. Essa abordagem é implantada para medir o potencial de ação disparado de neurônios no cinza periaquedutal ventrolateral - uma região do tronco encefálico inativa durante o sono REM (Rapid Eye Movement) - antes e durante a anestesia geral.

Gravações agudas de vários eletrodos de unidade única do tronco encefálico de camundongos com cabeça fixa

Este estudo apresenta um método escalável, confiável e reprodutível para registros corticais crônicos repetidos em um modelo suíno. O método tem aplicações em vários campos da neurociência, incluindo pesquisa da dor e diagnóstico de doenças neurológicas.

Técnica de janela craniana crônica para registros corticais repetidos durante anestesia em suínos

Aqui, apresentamos dois protocolos para registro de microeletrocorticografia de alta densidade (μEcoG) em ratos e camundongos, incluindo métodos cirúrgicos, de implantação e de registro. As gravações de μECoG são realizadas em combinação com a gravação de politrodo laminar no córtex auditivo de ratos ou com a manipulação optogenética da atividade neural no córtex somatossensorial de camundongos.

Investigações Multiescala de Processamento Cortical Integrando Politrodos Laminares e Optogenética com Microeletrocorticografia em Roedores

Aprenda um protocolo cirúrgico para criar uma janela craniana resselável em camundongos, permitindo registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão.

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo (Vídeo) | JoVE Journal

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

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