Культивирование и выделение капсулообразующих патогенных штаммов бактерий

Начинают с патогенных штаммов бактерий, культивируемых на отдельных агаровых пластинах.

Каждый штамм несет различные мутации в генах, ответственных за производство капсулы, защитного полисахаридного слоя.

Перенесите отдельные колонии из планшетов в отдельные пробирки, содержащие богатую питательными веществами жидкую среду, и инкубируйте.

Во время инкубации бактерии вступают в фазу экспоненциального роста и экспрессируют гены, производящие капсулы.

Мутации в этих генах приводят к изменениям в производстве капсул, создавая некапсулированные, слабо капсулированные и сильно капсулированные клетки.

Перенесите культуры и центрифугу для гранулирования клеток.

Некапсулированные и слабо капсулированные клетки образуют плотные гранулы, в то время как сильно капсулированные клетки,

благодаря своему гидратированному капсульному слою, образуют менее плотную гранулу.

Осторожно удалите надосадочную жидкость, чтобы избежать потери сильно капсулированных клеток.

Добавьте буфер, снова центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, чтобы удалить остаточную среду.

Ресуспендируйте клетки в буфере, чтобы стабилизировать бактерии, не способствуя дальнейшему росту, тем самым сохраняя структуру капсулы.

Выберите одну колонию из бульонной тарелки со стерильной петлей и введите 10 миллилитров соответствующего бульона.

Инкубируйте культуру в течение ночи. Затем переложите культуру в пробирку объемом 15 миллилитров, и запустите центрифугу. Далее выбросьте надосадочную жидкость, и повторно суспендируйте гранулу в двух миллилитрах PBS.

Повторите центрифугирование и выбросьте образовавшуюся надосадочную жидкость. Затем повторно суспендируйте гранулу в двух миллилитрах PBS.