Энциклопедия экспериментов JoVE
Microbiology
0 просмотров • 2:14 мин. • September 26th, 2025
Начнем с морского биолюминесцентного бактериального штамма, несущего люминесцентный оперон, который кодирует люциферазу и ферменты, необходимые для синтеза субстрата.
Нанесите нагрузку на богатую питательными веществами агаровую пластину, дополненную искусственной морской водой, чтобы имитировать естественную соленость и поддержать рост.
Инкубируйте для получения дискретных колоний, затем изолируйте и инокулируйте одну колонию в жидкую среду, содержащую искусственную морскую воду.
Инкубируйте с перемешиванием, чтобы стимулировать мгновенный рост в экспоненциальной фазе.
Перенесите определенный объем ночной культуры в свежую среду и инкубируйте ее для увеличения бактериальной плотности.
По мере расширения популяции бактерии выделяют аутоиндукторы, сигнальные молекулы, которые накапливаются и диффундируют в клетки, где связываются с внутриклеточными рецепторами, активируя люминесцентный оперон.
Эта активация индуцирует экспрессию люциферазы и биосинтез субстрата.
Люцифераза катализирует окисление субстрата, излучая сине-зеленый свет.
Мониторинг культуры на биолюминесценцию как индикатор активации люминесценции оперонов и светового излучения у морских бактерий.
После подготовки среды в соответствии с текстовым протоколом нанесите бактериальные биолюминесцентные штаммы на агаровые пластины искусственной морской воды и инкубируйте их при температуре от 24 до 30 градусов Цельсия в течение ночи.
Приготовьте культуру на ночь, введя 100 миллилитров искусственной морской водной среды в одну колонию из тарелки. Затем инкубируйте культуру при температуре от 24 до 30 градусов Цельсия и 120 об/мин в течение ночи. На следующий день введите 800 миллилитров искусственной морской водной среды с 8 миллилитрами ночной культуры.
Инкубируйте бактериальные клетки при температуре от 24 до 30 градусов Цельсия и 120 оборотах в минуту и наблюдайте за клетками, пока они не начнут сиять.