Энциклопедия экспериментов JoVE
Microbiology
0 просмотров • 2:19 мин. • September 26th, 2025
Возьмите с собой шприцы, содержащие полимерные полоски без антибиотиков и с высоким содержанием антибиотиков.
Наполните шприцы метаболически активной культурой болезнетворных бактерий.
Инкубируйте шприцы с встряхиванием, чтобы обеспечить равномерное воздействие бактерий на среду.
Во время инкубации антибиотики из загруженной полоски диффундируют в среду и подавляют рост бактерий.
В шприце с полоской без антибиотиков бактерии размножаются.
Соберите бактериальную суспензию из каждого шприца в микроцентрифужные пробирки.
Переложите аликвоты в многолуночную пластину.
Добавьте смесь реагентов, содержащую люциферин, фермент люциферазу и лизис.
Инкубируйте с встряхиванием, чтобы обеспечить лизис бактерий, который высвобождает клеточные компоненты, включая АТФ. АТФ управляет люциферазой-опосредованной люминесцентной реакцией.
С помощью считывателя микропланшетов запишите люминесценцию.
Бактериальная культура, подвергшаяся воздействию полоски, загруженной антибиотиками, демонстрирует сниженную люминесценцию по сравнению с культурой, не подвергавшейся воздействию антибиотиков.
Эта сниженная люминесценция подтверждает антибактериальную эффективность полоски, обогащенной антибиотиками.
Поместите первичные и наполненные лекарствами полоски СВМПЭ в трехмиллилитровый шприц. Затем наберите в шприц через прилагаемую иглу бактериальную суспензию MHB, содержащую до отметки 1,5 миллитра.
Поместите набор шприцев на встряхивающий инкубатор до указанных временных отметок в шесть часов, а затем каждый день до седьмого дня. После каждого указанного момента времени выньте набор шприца и раздайте среду в двухмиллилитровую пробирку. Проведите анализ жизнеспособности микроорганизмов в режиме реального времени, как описано в рукописи, используя 100 микролитров бактериальной суспензии.