Оценка влияния полезных бактерий на кишечную микробную транслокацию у крыс, подвергшихся тепловому стрессу

Начните с экспериментальной крысы, предварительно обработанной полезными бактериями, и контрольной крысы, которой вводили фосфатно-солевой буфер или PBS.

Подвергните обеих крыс воздействию высоких температур, чтобы вызвать физиологический стресс.

У контрольной крысы тепловой стресс нарушает эпителиальный барьер кишечника, позволяя бактериям кишечного происхождения перемещаться и распространяться во внутренние органы.

Однако у подопытных крыс полезные бактерии выделяют сигнальные молекулы, которые сохраняют эпителиальные соединения и уменьшают бактериальную транслокацию.

Возьмите пробирки, содержащие образцы печени, собранные у каждой крысы.

Добавьте PBS и гомогенизируйте образцы, чтобы выпустить бактерии в буфер.

Разбавленный гомогенат разложите по тарелкам с богатым питательными веществами агарами.

Инкубируйте планшеты, чтобы дать возможность образоваться колониям бактерий. Затем посчитайте колонии.

Более высокое количество колоний в контрольном образце указывает на нарушение кишечного барьера и бактериальную транслокацию.

Напротив, меньшее количество колоний в экспериментальном образце указывает на влияние полезных бактерий на ограничение бактериальной транслокации в кишечник.

После обработки крыс пероральным зондированием B.subtilis BSB3 или PBS в течение двух дней, затем разделения животных и измерения их температуры, содержание крыс из первой и второй групп при комнатной температуре в течение 25 минут. Поместите животных третьей и четвертой групп в климатическую камеру при температуре 45 градусов Цельсия и относительной влажности 55% на 25 минут.

Затем, после усыпления животных, сбора крови из туловища и выделения органов в соответствии с текстовым протоколом, добавляют стерильный PBS в каждую пробирку, чтобы получить разведение образца от одного до десяти весов на объем, и используют гомогенизатор из стерильной стеклянной ткани для получения однородных тканевых суспензий.

Затем используйте стерильный PBS для последовательного разведения каждого образца. Затем нанесите 0,1 миллилитра всех разведений на поверхность агара Мак-Конки и 5% кровяного агара, а также кровяной агар бруцеллы с гемином и витамином К1. После инкубации пластин используйте счетчик колоний, чтобы подсчитать колонии на каждой группе пластин.