Энциклопедия экспериментов JoVE
Microbiology
0 просмотров • 2:53 мин. • November 28th, 2025
Начните с микрофлюидного устройства, установленного на сцене инвертированного флуоресцентного микроскопа.
Устройство состоит из полимерного чипа с горизонтальными каналами подачи. Каждый канал выстилан серией узких траншей, герметичных на одном конце и предназначенных для удерживания бактериальных клеток в линейных цепях.
Внутри траншей находятся неподвижные бактериальные клетки, экспрессирующие флуоресцентный белок, что позволяет им визуализировать.
Каждый канал подачи подключён к шприцовым насосам, которые подают питательную среду с контролируемым расходом.
Инициировать поток, чтобы среда могла диффундировать в траншеи и поддерживать рост бактерий.
Замкнутые бактериальные клетки делятся внутри траншеи, образуя цепочку потомства.
Конструкция траншеи гарантирует, что новые ячейки на открытом конце смываются, что позволяет долго отслеживать самые старые ячеки.
С течением времени снимайте траншеи для отслеживания роста и деления отдельных бактериальных клеток.
Аккуратно закрепляйте загруженное устройство на вставку сцены, приклеив стекло крышки с обеих сторон PDMS к нижней части вставки. Переверните сборку устройства вставки ступени так, чтобы PDMS была направлена вверх, и разместите его на мягкой поверхности, например, на салфетку без пыли.
Отрегулировать скорость потока шприцового насоса первой фазы до 35 микролитров в минуту. Затем работая по одной линии за раз, вставляя впускную стрелку, а затем иглу выхода, которая идёт к стакану для отходов. После визуального осмотра устройства на наличие протечек проверьте выходную трубку на наличие избыточных клеток, которые выглядят мутной полосой в среднем мениске, которые постепенно будут двигаться к стеку для отходов.
После примерно 15 минут работы установите насос первой фазы на 1,5 микролитра в минуту и приостановите поток. Перенесите весь насос и устройство к инвертированному люминесцентному микроскопу и возобновите поток среды первой фазы со скоростью 1,5 микролитра в минуту. Аккуратно закрепите вставку для сцены с устройством на микроскоп, используя ленту по мере необходимости для прокладки входной и выходной трубок.
Определите нужные позиции устройства для съёмки и начните съёмку по желанию. Обратите внимание, что клеткам обычно требуется несколько часов для чтения стационарного режима, экспоненциального роста фазы, а начало получения изображения может быть задержено по желаемому результату, чтобы после периода равновесия началась визуализация.