Создание мышиной модели экспериментальной церебральной малярии с использованием спорозоитов, полученных от комаров-хозяев

Начните с трубки, содержащей слюнные железы самок комаров, инфицированных Plasmodium berghei — паразитом, вызывающим малярию.

Механически нарушают работу желез, выделяя в среду спорозоиты — инфекционную форму паразита.

Гранулируем железистые фракции и мусор. Соберите спорозоит-содержащие надосадочные жидкости и введите их в хвостовую вену сдерживаемой мыши.

Введенные спорозоиты путешествуют по кровотоку и достигают печени, где они заражают гепатоциты и размножаются, образуя мерозоиты — инвазивную форму паразита.

Со временем гепатоциты выделяют мерозоиты в кровоток, вторгаясь в эритроциты, или эритроциты.

Внутри эритроцитов мерозоиты размножаются бесполым путем, развиваясь в зрелую форму и экспрессируя антигены, полученные от паразитов, на поверхности эритроцитов.

Эти антигены связываются с эндотелиальными рецепторами, в том числе в кровеносных сосудах головного мозга, что приводит к секвестрации инфицированных и неинфицированных эритроцитов.

Это аномальное накопление эритроцитов нарушает гематоэнцефалический барьер, вызывая накопление жидкости в паренхиме мозга и развитие церебральной малярии у мышей.

Начните со сбора самок комаров из клетки через 17-22 дня после приема пищи кровью. С помощью щипцов поместите от 3 до 4 комаров на предметное стекло, покрытое каплей холодной среды RPMI. Затем поместите предметное стекло под микроскоп.

Осторожно растяните комара между головой и телом с помощью щипцов, а с помощью шприца и иглы изолируйте слюнную железу. Далее соберите слюнные железы со предметного стекла, всасыв их стеклянной пипеткой, и перенесите в 1,5-миллилитровую центрифужную пробирку. Затем с помощью небольшой пластиковой палочки раздавите изолированные слюнные железы в центрифужной пробирке в течение трех минут, чтобы изолировать спорозоиты от ткани слюнных желез.

Центрифугируйте в течение трех минут при температуре 1000 g при 4 градусах Цельсия, чтобы очистить спорозоиты от оставшейся ткани. Пипеткой надосадочная жидкость, содержащая спорозоиты, подается в новую центрифужную пробирку и подсчитываются очищенные спорозоиты в гемоцитометре Нейбауэра. Спорозоиты демонстрируют типичное движение против часовой стрелки.

Затем отрегулируйте концентрацию очищенных спорозоитов до 10 000 на миллилитр, добавив фосфатно-солевой буфер. Наконец, поместите мышь C57BL6 в удерживающее устройство и опустите ее хвост в теплую воду, чтобы лучше визуализировать хвостовую вену. Затем введите в общей сложности 1000 спорозоитов, или 0,1 миллилитра, в хвостовую вену, чтобы инициировать инфекцию.