Разработка нейронных шариков с помощью техники культивирования висячих капель

Начните с суспензии одиночных клеток эмбриональных нейронов мыши в нейробазальной среде.

Среда содержит необходимые питательные вещества для поддержания жизнеспособности клеток.

Нанесите небольшие капли этой клеточной суспензии на крышку неадгезивной чашки для культур, следя за тем, чтобы они находились на расстоянии друг от друга.

Переверните крышку, в результате чего образуются свисающие капли.

Расположите крышку над чашкой с буфером, чтобы создать влажную среду, предотвращающую испарение среды и инкубацию.

Внутри висячих капель поверхностное натяжение жидкости поддерживает форму капли.

Такое удержание формы ограничивает клетки ограниченным пространством, не распространяясь.

Кроме того, гравитационные силы внутри капель направляют клетки в нижнюю область.

По мере того, как нейронные клетки-предшественники вступают в более тесный контакт, они спонтанно агрегируются, образуя трехмерную структуру, известную как нейронный шар.

Для приготовления нейронных шариков отрегулируйте плотность клеток в этой клеточной суспензии до 1 миллиона клеток на миллилитр с помощью среды NGB. Добавьте 7 миллилитров PBS в нижнюю часть посуды для культуры. Культивируйте корковые нейроны в виде висячих капель объемом 10 микролитров, содержащих 10 000 клеток на каплю, внутри верхних век 10-сантиметровых тарелок для культивирования. Держите посуду в инкубаторе в течение трех дней при температуре 37 градусов Цельсия с 5%_CO2 в увлажненных условиях, чтобы обеспечить образование нейронного шара.