Разработка инженерной 3D-модели поляризованной нервной ткани на основе шелка и коллагена

Поместите пористые шелковые каркасы в форме пончика, покрытые поли-D-лизином, в многолуночную пластину.

Добавляйте питательные среды для увлажнения каркасов, облегчая прикрепление клеток.

Асасировать избыток среды. Засейте скаффолды суспензией нейронных клеток и инкубируйте.

Покрытая поверхность и поры каркаса обеспечивают большую площадь поверхности для прикрепления клеток высокой плотности и способствуют эффективной диффузии питательных веществ и отходов.

Удалите неприкрепленные клетки и добавьте коллаген, белок внеклеточного матрикса.

Инкубация для полимеризации коллагена. Этот процесс встраивает клетки в гелеобразную 3D-матрицу на пористом каркасе.

Добавляйте медиафайлы. Культивируйте, и регулярно заменяйте половину питательных сред для восполнения питательных веществ, не нарушая работу клеток.

В культуре тела нейронных клеток остаются закрепленными на шелковом каркасе, в то время как аксоны растут через коллагеновый матрикс, образуя трехмерные сети аксонов.

Это компартментализированное клеточное тело и аксональная локализация приводят к формированию трехмерной модели поляризованной нервной ткани, подобной мозгу.

Поместите в колпак для клеточных культур пару стерилизованных щипцов, среды для клеточных культур и автоклавные каркасы. Извлеките из упаковки пластину на 96 лунок и поместите внутрь. Чтобы засеять каркасы, сначала поместите по одному стерильному каркасу на лунку в 96-луночный планшет. Добавьте среду для клеточных культур, чтобы погрузить каркасы, и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в инкубаторе для тканевых культур, чтобы уравновесить их в течение не менее 30 минут.

После инкубации отсасывайте лишнюю среду из каркасов. Затем добавьте 2 раза по 10 к 6 нейронным клеткам коры головного мозга крысы по 100 микролитров нейробазальной среды на скаффолд. Верните тарелку в инкубатор и оставьте на ночь, чтобы клетки могли прикрепиться к каркасу. На следующее утро осторожно аспирируйте неприкрепленные клетки и замените их 200 микролитрами свежей клеточной питательной среды. Инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение короткого периода времени.

Далее отсасывайте среду из лунок. С помощью стерильных щипцов перенести скаффолды, содержащие клетки, в пустые лунки 96-луночного планшета. Затем к каждому скаффолду добавьте по 100 микролитров свежеразведенного ледяного 3 миллиграмма на миллилитр раствора коллагена крысиного хвоста.

Верните клетки в инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия, чтобы обеспечить полимеризацию коллагена в течение 30 минут. Выньте тарелку из инкубатора, и добавьте 100 микролитров предварительно подогретой среды для клеточных культур на лунку. Верните тарелку в инкубатор на желаемый период роста клеток, заменяя половину среды из каждой лунки свежей средой каждый день в течение одной недели.